原虫特異的アプタマーの作製および診断・治療への応用に関する基礎的研究

• Project/Area Number: 14656119
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Applied veterinary science
• Research Institution: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• Principal Investigator: 井上 昇 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 助教授 (10271751)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 杉本 千尋 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (90231373) ; 鈴木 宏志 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (60333473) ; 田仲 哲也 北海道大学, 大学院・農学研究科, 助手 (00322842)
• Project Period (FY): 2002 – 2003
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2003)
• Budget Amount: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000); Fiscal Year 2003: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2002: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
• Keywords: トリパノソーマ / アプタマー / LDL / トランスフェリン / SELEX

Research Abstract

1.リパノソーマ増殖に必須であることが報告されているLDLおよびトランスフェリン(TF)に着目し,これらの血漿成分に対するアプタマーが虫体の増殖を阻害するか否かを検討した。予備的に作製した抗牛LDLおよび抗牛TF抗体を用いてIn Vitroでの増殖阻害試験を行った結果,両抗体共に明らかな増殖阻止効果は認められなかった。
2.アプタマー作製用オリゴヌクレオチドを用いた抗トリパノソーマDNAアプタマーの作製においても現時点では期待する増殖阻止効果を示すアプタマーは得られていない。今後さらにペプチドアプタマーなども試験していく必要があると思われる。
3.トリパノソーマ抽出物およびトリパノソーマ虫体に対するDNA/RNAアプタマー作製を試みた。今後考慮・改善すべき点として、DNAまたはRNAアプタマーと細胞由来DNA/RNA結合性蛋白質などとの相互作用によってSELEX反応に予期せぬ選択圧が生じることが考えられる。細胞体あるいは細胞抽出物のような雑多な生体分子の混合物に対するアプタマー作製に当たってはペプチドアプタマーあるいはファージディスプレイなども利用すべきであろう。