新たに発見された活性型L1レトロトランスポゾンの実験病理学への応用

• Project/Area Number: 14657055
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Experimental pathology
• Research Institution: Shinshu University
• Principal Investigator: 樋口 京一 信州大学, 医学研究科, 教授 (20173156)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 森 政之 信州大学, 医学部, 助教授 (60273190)
• Project Period (FY): 2002 – 2003
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2003)
• Budget Amount: ¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000); Fiscal Year 2003: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000); Fiscal Year 2002: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
• Keywords: レトロトランスポゾン / ラット / L1 / 突然変異 / Chediak-Higashi症候群 / Lyst / ベージュラット

Research Abstract

ラットのlysosomal trafficking regulator(Lyst)遺伝子内に存在するL1bレトロトランスポゾンに関して以下の知見を得た。
1.L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトして、転移の生じたG418耐性コロニーを多数得た。L1bの転移挿入先の遺伝子の3'RACE法による同定を試みた。しかしながら、全クローンコロニーにおいてL1b内の同一部位を利用したpoly A化が生じており、遺伝子の同定には至らなかった。そこでL1bとG418耐性マーカー遺伝子との間にスプライスドナーを挿入した新たな発現コンストラクトを作製し、同様の検討を行なっている。
2.無細胞蛋白合成系によるL1bのORF1およびORF2産物の大量調製を試みた。ベクターとしてpET-21aを使用したが、蛋白質合成は認められなかった。そこで無細胞蛋白合成系により適したpIVEX2.3ベクターを使用したコンストラクトを作製し、同様の検討を行なっている。
3.serial analysis of gene expression(SAGE)法を用いて3ヶ月齢のBDF1系マウス精巣でのL1配列の発現パターンを調査した。また、老化して精巣での染色体DNAのメチル化などに乱れが生じた場合にともないL1の転写活性が変化する可能性を調査するために、29ヶ月齢のBDF1系マウス、および促進老化のモデルである14ヶ月齢のSAMP1系マウスを用いて、同様に調査を行なった。その結果、いずれの系統、月齢においてもL1配列の発現は極めて低いことが明らかとなった。L1bのマウス精巣における高発現を誘起するために、精巣特異的プロモーターであるヒストンH1t遺伝子のプロモーターの下流にL1bを連結した発現コンストラクトを作製中である。

Research Products

• [Publications] Guo Z, Mori M, Fu X, Yao J, Xing Y, Korenaga T, Li G, Matsushita T, Hosokawa M, Higuchi K: "Amyloidosis modifier genes in less amyloidogenic A/J mouse strain."Laboratory Investigations. 83(11). 1605-1613 (2003)
• [Publications] Guo Z, Higuchi K, Mori M: "Spontaneous hypomorphic mutations in antioxidant enzymes of mice."Free Radical Biology and Medicine. 35(12). 1645-1652 (2003)
• [Publications] Masui N, Mori M, Nishikawa T, Takagi Y, Asai H, Yanabe M, Yamasaki K, Serikawa T, Sato K: "An allele-specific genotyping method for rat Lyst (lysosomal trafficking regulator) gene."Experimental Animals. 53(1). 77-80 (2004)
• [Publications] Kitagawa K, Wang J, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Fu X, Guo Z, Mori M, Higuchi K: "Polymorphisms of mouse apolipoprotein A-II : seven alleles found among 41 inbred strains of mice."Amyloid. 10(4). 207-214 (2004)
• [Publications] Yao J, Chiba T, Sakai J, Hirose K, Yamamoto M, Hada A, Kuramoto K, Higuchi K, Mori M: "Mouse testis transcriptome revealed using serial analysis of gene expression."Mammalian Genome. 印刷中. (2004)
• [Publications] 樋口京一, 森 政之: "分子生物学・免疫学キーワード辞典(第2版)(永田和宏、宮坂昌之、 宮坂信之、山本一彦 編集)"医学書院(東京). 1036 (2003)
• [Publications] Mori M, Yamasaki K, Nakanishi S, Kitada K, Higuchi K, Namiki C, Hamada S, Serikawa T.: "A New Beige Mutant Rat ACI/N-Lystbg-Kyo"Exp. Anim. 52(in press). (2003)
• [Publications] Xing Y, Nakamura A, Korenaga T, Guo Z, Yao J, Fu X, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Kametani F, Mori M, Higuchi K: "Induction of protein conformational change in mouse senile amyloidosis"J. Biol. Chem.. 277. 33164-33169 (2002)
• [Publications] Xing Y, Higuchi K: "Amyloid Fibril Proteins"Mech Ageing Dev. 123. 1625-1636 (2002)
• [Publications] Shimizu M, Higuchi K, Kasai S, Tsuboyama T, Matsushita M, Matsumura T, Okudaira S, Mori M, Koizumi A, Nakamura T, Hosokawa M.: "A congenic mouse and candidate gene at the Chr 13 locus regulating bone density"Mamm. Genom. 13. 335-340 (2002)
• [Publications] Suzuki T, Tozuka M, Kazuyoshi Y, Sugano M, Nakabayashi T, Okumura N, Hidaka H, Katsuyama T, Higuchi K.: "Predominant apolipoprotein J exists as lipid-poor mixtures in cerebrospinal fluid"Ann Clin Lab Sci.. 32. 369-376 (2002)
• [Publications] Ohta A, Akiguchi I, Seriu N, Ohnishi K, Yagi H, Higuchi K, Hosokawa M.: "Deterioration in learning and memory of inferential tasks for evaluation of transitivity and symmetry in aged SAMP8 mice"Hippocampus. 12. 803-810 (2002)