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FRETを用いたエキソサイトーシス時のリガンド、受容体の細胞内移動の解析

Research Project

Project/Area Number 14657422
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Obstetrics and gynecology
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

田坂 慶一  大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (50155058)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 坂田 正博  大阪大学, 医学部附属病院, 助教授 (10260639)
大道 正英  大阪大学, 医学系研究科, 講師 (10283764)
田原 正浩  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (00294091)
武田 卓  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (20301260)
森重 健一郎  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (90283788)
Project Period (FY) 2002 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
KeywordsFRET / Rho
Research Abstract

蛋白質をはじめとする生体内機能分子の働きを生きた細胞内で観測する手段として、蛍光蛋白質を利用したFRET(Fluorescence energy transfer、蛍光エネルギー移動)を用いたエキソサイトーシス時のリガンド、受容体の細胞内移動動態を観察するために設定したFRETを用いたシステムの立ち上げに困難さを経験している。そこで、まず、いままでに実績のある、細胞内メッセンジャータンパク質である低分子量G蛋白のRasとRhoとおよびそのエフェクター蛋白であるRaf, PKNとの間のFRET現象の観察を試みた。細胞は我々にとって使い慣れており、かつ管理および操作が容易なCaov3(ヒト卵巣癌細胞由来細胞株)を用いた。RASにYFP(黄色蛍光色素)、RafにCFP(青色蛍光色素)を含むプラスミドを作成した。両者を一時的に発現することには成功したが、その安定的観察のためにはなんらかの科学的捜査が必要である。またFRET現象を観察するためには2分子の安定的バランスが必要である。両蛋白を同時に等量づつ発現させるために2つのプラスミドをhinge(蝶番)でつないで一つのプラスミドとして均等に発現するようシステムを開発中であるが、未だ確立に至っていない。平行してRhoにCFP、PKNにYFPをつないだプラスミドを作成し、検討も行っているが同様の問題を解決できないでいる。以上の困難さより計画自身の遂行にも困難さを来している。

Report

(3 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • 2002 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2005 Other

All Journal Article (2 results) Publications (1 results)

  • [Journal Article] Geranylgeranylacetone inhibits lysphosphatidic acid-induced invasion of human ovarian cancer cells in vitro2005

    • Author(s)
      Hashimoto, K., et al.
    • Journal Title

      Cancer (in press)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Alendronate inhibits intraperitoneal dissemination in in vivo ovarian cancer model2005

    • Author(s)
      Hasimoto, K., et al.
    • Journal Title

      Cancer Res (in press)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Publications] Nakatsuji, Y., et al.: "Epidermal growth factor enhances invasive activity of BeWo choriocarcinoma cells by inducing α2 integrin expression"Endocrine J. 50. 703-714 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report

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Published: 2002-04-01   Modified: 2016-04-21  

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