| Budget Amount *help |
¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000)
Fiscal Year 2004: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
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| Research Abstract |
シロイヌナズナキチナーゼ遺伝子(AtchiV)とラン藻FBP/SBPase遺伝子(fbp/sbp)をタバコへ同時に植物に導入するために、多重遺伝子導入法とMATベクター法の2通りで行った。AtChiV遺伝子を導入したMATベクタープラスミドDNAを、アグロバクテリウムを介してすでに葉緑体にFBP/SBPaseが導入されているタバコ(TpFS)に導入した。感染時間・培養期間・抗生物質の処理条件等を検討し、ホルモン無添加MS培地により選抜を行った。約3500枚のリーフディスクから約114枚がカルス化した。一方、AtChiV遺伝子とFBP/SBPase遺伝子を連結した多重遺伝子プラスミドDNAを、アグロバクテリウムを介してタバコ野生株に導入した。ホルモン・カナマイシン添加MS培地により様々な条件下で選抜を行ったところ、約400枚のリーフディスクから約20枚がカルス化した。これら薬剤耐性株より植物体の再生を試みたところ、いずれも他の遺伝子導入カルスに比べて生育は悪いものの、シュートの形成が見られた。現在これらのシュートより、植物体の再生、評価を試みている。一方、シロイヌナズナキチナーゼアイソザイム(AtchiA, AtchiB, AtchiV)をそれぞれ単独で過剰発現させた形質転換体を作製した。その結果、いずれのアイソザイム遺伝子を導入した株も著しく生育が抑制され、特にAtchiV導入株では、ロゼッタの展開は見られるものの、柱台せずに枯死した。
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