• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to previous page

プロテインメモリー現象によるタンパク質の構造変化と保持機構の解明

Research Project

Project/Area Number 14760064
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 応用微生物学・応用生物化学
Research InstitutionNational Food Research Institute

Principal Investigator

韮澤 悟  独立行政法人食品総合研究所, 生物機能開発部, 主任研究官 (10343823)

Project Period (FY) 2002 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2004: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 2003: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2002: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Keywords分子内シャペロン / アミノペプチターゼ / X線結晶構造解析 / キメラ酵素 / プロ酵素 / アミノ酸変異体 / アミノペプチダーゼ / アミノ酸部位特異的変異
Research Abstract

本課題では、金属エキソペプチダーゼであるアエロモナスアミノペプチダーゼにおいてプロテインメモリー現象を引き起こす分子内シャペロンの特性を解析するとともに、分子内シャペロンの変異によって生じる成熟体部分の立体構造の変化を原子レベルで解明することが目的である。本年度は下記1、2の研究結果が得られた。
1、アエロモナスアミノペプチダーゼと同じファミリーに属し、約60%のアミノ酸配列の相同性を持つビブリオアミノペプチダーゼを用いて分子内シャペロン部位を交換したキメラ酵素を対象に、X線結晶構造解析および立体構造モデルの構築、精密化を行った。その結果、キメラアミノペプチダーゼプロ体について、R=20.1%の構造モデルを得た。金属エキソペプチダーゼにおいて、分子内シャペロン部位の立体構造を明らかにしたのは、これが初めてである。さらに、構造モデルの解析の結果、分子内シャペロン部位はCys77を介して金属原子と相互作用していること、分子内シャペロンのプロセシング部位が分子表面に存在していること、分子内シャペロン部位の疎水性アミノ酸が疎水コアを形成していることが推定できた。
2、分子内シャペロン部位の各種アミノ酸変異体を取得した結果、Trp24、Ile25、His71、Glu72、Cys77の各アミノ酸残基が酵素全体のフォールディングに重要な役割を担っていることが明らかになった。

Report

(3 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • 2002 Annual Research Report
  • Research Products

    (12 results)

All 2005 2004 Other

All Journal Article (4 results) Publications (8 results)

  • [Journal Article] Characterization and kinetic analysis of enzyme-substrate recognition by three recombinant lactococcal tripeptidases2005

    • Author(s)
      S.Mori, S.Nirasawa, S.komba, T.Kasumi
    • Journal Title

      Biochimica et Biophysica Acta 1748

      Pages: 26-34

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Chitobiose phosphorylase from Vibrio proteolyticus, a member of glycosyl transferase family 36,has an (alpha/alpha)6 barrel fold like clan GH-L2004

    • Author(s)
      M.Hidaka, Y.Honda, M.Kitaoka, S.Nirasawa, K.Hayashi, T.Wakagi, H.Shoun, S.Fushinobu
    • Journal Title

      Structure 12・6

      Pages: 937-947

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Recombinant curculin heterodimer exhibits taste-modifying and sweet-tasting activities2004

    • Author(s)
      M.Suzuki, E.Kurimoto, S.Nirasawa, Y.Masuda, K.Hori, Y.Kurihara, N.Shimba, M.Kawai, E.Suzuki, K.Kato
    • Journal Title

      FEBS Letters 573

      Pages: 135-138

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Splitting monomeric enzyme of family 3 b-glucosidase into two molecules while recovering the catalytic activity2004

    • Author(s)
      K.Hayashi, B.J.Kim, M.Selanere, S.Nirasawa, M.Kitaoka
    • Journal Title

      Biotechnology of Ligunocellulose Degradation and Biomass Utilization

      Pages: 728-735

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Publications] Nirasawa, S., Hayashi, K.: "Construction and characterization of a chimeric aminopeptidase"Protein science. 12. 148 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Nishimoto, M., Fushinobu, S., Miyanaga, A., Wakagi, T., H.Shoun, H., Sakka, K., Ohmiya, K., Nirasawa, S., Kitaoka, M., Hayashi, K.: "Crystallization and preliminary X-ray analysis of xylanase B from Clostridium stercorarium"Acta Crystallographica Section D. 60・2. 342-343 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Nirasawa, S., Hayashi, K.: "[M647] Pro-aminopeptidase processing protease : In The Handbook of Proteolytic Enzymes, 2nd edn."Barrett, A., Rawlings, N., Woessner, F.. 2 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Nirasawa, S., Hayashi, K.: "Role of the N-terminal propeptide of bacterial zinc aminopeptidase in folding and stability"Protein science. 12. 78 (2003)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Tang, B., Nirasawa, S., Kitaoka, M., Marie-Claire, C., Hayashi, K.: "General function N-terminal propeptide on assisting Protein folding and inhibiting catalytic activity based on observations with a chimeric thermolysin-like protease"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 301・4. 1093-1098 (2003)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Tang, B., Nirasawa, S., Kitaoka, M., Ma, Hayashi, K.: "The role of the N-terminal propeptide of the pro-aminopeptidase processing Protease : refolding, processing, and enzyme inhibition"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 296・1. 78-84 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Tang, B., Nirasawa, S., Kitaoka, M., Ma, Hayashi, K.: "In vitro stepwise autoprocessing of the proform of proaminopeptidase processing Protease from Aeromonas caviae T-64"Biochim.Biophys. Acta. 1596・1. 16-27 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Majibuf, R.M., Bhuiyan, S.H, Nirasawa, S., Kitaoka, M., Ma, Hayashi, K.: "Characterization of an endo-beta-1, 4-glucanase of Thermotoga maritima expressed in Escherichia coli"Journal of Applied Glycoscience. 49・4. 487-495 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report

URL: 

Published: 2002-04-01   Modified: 2016-04-21  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi