免疫標識法によるスギ心材ノルリグナンの分布の可視化

• Project/Area Number: 14760111
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 林産学
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 今井 貴規 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 助教授 (20252281)
• Project Period (FY): 2002 – 2004
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2004)
• Budget Amount: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000); Fiscal Year 2004: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000); Fiscal Year 2003: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2002: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
• Keywords: 免疫標識 / ノルリグナン / アガサレジノール / スギ / 免疫標品

Research Abstract

昨年度までに、アガサレジノールのような低分子化合物の免疫電子顕微鏡観察を目指すとき、その化合物が、試料調製(植物組織の固定・脱水・包埋、超薄切片の調製、および超薄切片の抗血清処理)において本来の存在場所から移動し、さらに組織外へ溶脱した可能性が示され、この問題の対策として、(1)低温下・短時間での試料調製、(2)試料の凍結乾燥、(3)試料のカフェイン溶液処理、を試みた。しかしながら、免疫標識の十分な改善は達成されなかった。本年度、「前固定免疫標識法(あらかじめ低分子量物質と抗体タンパクとを結合させる、タンパク質の固定は比較的容易である)」を試みた。この方法では、Fab断片の調製が必要となるため、その調製を行った。まず親和クロマトグラフ法によって抗アガサレジノール抗血清からIgG画分を分取し、続いてこの画分をパパインで酵素分解し、分解物から親和クロマトグラフ法によってFab断片を単離した。得られたIgG画分およびFab断片の抗体活性を免疫検定した。その結果、IgG画分は認識選択性は向上したものの、活性自体は低下し、Fab断片に関しては濃度が極めて薄く、活性も低下した。これらのIgG画分およびFab断片は、免疫組織化学的検討には不適当であり、血清の精製方法を検討する必要がある。

Research Products

• [Journal Article] Induction of the biosynthesis of agatharesinol, a norlignan, in sapwood sticks of Cryptomeria japonica under humidity-regulated circumstance (2005)
  • Author(s): T.Imai et al.
  • Journal Title: Journal of Wood Science (in press)
  • NAID: 10018275276
• [Journal Article] Localisation of ferruginol, a heartwood diterpene phenol, in Cryptomeria japonic by time-of-flight secondary ion mass spectrometry (TOF-SIMS) (2005)
  • Author(s): T.Imai et al.
  • Journal Title: Planta (in press)
• [Journal Article] Characterization of physiological functions of sapwood IV : Formation and accumulation of lignans in sapwood of Cryptomeria japonica in the withering process (2005)
  • Author(s): T.Imai et al.
  • Journal Title: Holzforschung (in press)
• [Journal Article] Detection in situ and characterization of lignin in the G-layer of tension wood fibers of Populus deltoides (2004)
  • Author(s): J.-P.Joseleau, et al.
  • Journal Title: Planta 219 Pages: 338-345
• [Publications] T.Nagasaki et al.: "Studies on the immunolabeling of heartwood extractives : characterization of anti-agatharesinol antiserum"J.Wood.Sci.. 50・1. 82-86 (2004)
• [Publications] Y.Hosoo et al.: "Diurnal differences in the innermost surface of the S2 layer in differentiating tracheids of Cryptomeria japonica corresponding to a light-dark cycle"Holzforschung. 57. 567-573 (2003)
• [Publications] T.Nagasaki: "Immunohistochemical localization of agatharesinol, a heartwood norlignan, in Cryptomeria japonica"Phytochemistry. 60. 461-466 (2002)
• [Publications] Y.Hosoo: "Diurnal difference in the amount of immunogold-labeled glucomannans detected with field emission scanning electron microscopy at the innermost surface of developing secondary walls of differentiating conifer tracheids"Planta. 215. 1006-1012 (2002)
• [Publications] Y.Matsushita: "Effect of chemical composition and wood properties on kraft pulping of eucalyptus"Emorging technologies of pulping and papermaking. 1. 67-73 (2002)
• [Publications] 今井貴規(共著): "木質の形成-バイオマス科学への招待"海青社. 382 (2003)