新しいIκBタンパク質MAILのLPS炎症反応における役割および作用機序の解明

• Project/Area Number: 14760184
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Basic veterinary science/Basic zootechnical science
• Research Institution: The Institute of Physical and Chemical Research
• Principal Investigator: 北村 浩 独立行政法人理化学研究所, 免疫ゲノミクス研究グループ, 上級研究員 (80312403)
• Project Period (FY): 2002 – 2004
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2004)
• Budget Amount: ¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000); Fiscal Year 2004: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2003: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000); Fiscal Year 2002: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
• Keywords: IκB / 炎症 / NFκB / アトピー性皮膚炎 / リポ多糖体 / マクロファージ / NF-κB / マイクロアレイ / cDNAアレイ / MAIL / Bリンパ球 / TLR4

Research Abstract

グラム陰性菌のリポ多糖体(LPS)により惹起される炎症反応に重要な役割を果たすと考えられる7つ目のIκBタンパク質であるMAIL (Molecule possessing ankyrin-repeats induced by lipopolysaccharide)について研究を展開した。平成15年度にまでにMAIL解析のためのcDNAアレイを作製した。本年度は、このアレイと、より網羅性の高い市販のアレイを併用し、培養細胞およびMAIL遺伝子ノックアウトマウスの発現解析を実施した。また、家畜におけるMAILの役割を調べるため様々な種のMAILの同定を試みた。
1.LPSや炎症性サイトカイン刺激時に、MAILノックアウトマウスより分離培養した線維芽細胞において誘導の低下・欠落のみられる遺伝子のリストアップをアレイにより行った。IL6を含め種々のサイトカインの産生が大幅に低下していた。
2.MAILノックアウトマウスの皮膚にはアトピー様の皮膚炎が確認され、TARCなどのサイトカインの産生が亢進していた。
3.平成15年度までに同定したウシのMAILオルソログに加えて、ニワトリ、ヤギ、ヒツジ、ブタなどのMAILのオルソログの部分配列を決定した。
4.MAILの発現を安定的に阻害するshRNA発現ベクターを構築した。これを使用することにより、今後多量に調製することが難しい細胞のMAILの機能解析に有効な道具になると思われる。

Research Products

• [Journal Article] Targeted disruption of MAIL, a nuclear IκB protein, leads to severe atopic dermatitis-like disease (2004)
  • Author(s): Shiina T et al.
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry 279・53 Pages: 55493-55498
• [Journal Article] Transcriptional regulation of the MAIL gene in LPS-stimulated RAW264 mouse macrophages (2004)
  • Author(s): Ito T et al.
  • Journal Title: Gene 342・1 Pages: 137-143
• [Journal Article] Cloning of bovine MAIL and its mRNA expression in white blood cells of Holstein cows (2004)
  • Author(s): Yamaji D et al.
  • Journal Title: Veterinary Immunology and Immunopathology 98・3-4 Pages: 175-184
• [Journal Article] A simple and robust method for preparation of cDNA nylon microarrays (2004)
  • Author(s): Yamakawa H et al.
  • Journal Title: DNA Research 11・5 Pages: 353-360
• [Journal Article] DNA/RNA試料調製 (2004)
  • Author(s): 北村 浩 他
  • Journal Title: 蛋白質・核酸・酵素 49・11 Pages: 752-756
• [Publications] Kitamura H. et al.: "Bacterial Iipopolysaccharide-induced expression of the IkappaB protein MAIL in B-lymphocytes and macrophages."Arch Histol Cytol.. 66・1. 53-62 (2003)
• [Publications] Kitamura H.et al.: "Bacterial Lipopolysaccharide Induces mRNA Expression of an IκB MAIL through Toll-Like Receptor 4"Journal of Veterinary Medical Science. 64.5. 419-422 (2002)