ラット膀胱癌におけるエレクトロポレーション法を用いた遺伝子治療法に関する研究

• Project/Area Number: 14770814
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Urology
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 桑原 朋広 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 助手 (90305003)
• Project Period (FY): 2002 – 2004
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2004)
• Budget Amount: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000); Fiscal Year 2004: ¥300,000 (Direct Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2003: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000); Fiscal Year 2002: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: 膀胱腫瘍 / HS-tk遺伝子 / エレクトロポレーション法 / マイクロダイアリシス / BTモデルラット / BBN / エレクトロポレーション / ルシフェラーゼ遺伝子 / GFP遺伝子

Research Abstract

本年度は膀胱腫瘍に対するHS-tk遺伝子導入による自殺遺伝子治療の効果を検討した。8週齢ラットに12週間0.05%BBN含有水を投与した膀胱癌ラットを4群に分けた(各5匹)。
1)sham operation群:開腹し膀胱内に溶媒0.1mlのみ注入しエレクトロポレーション施行しない群
2)プラスミド単独群:開腹し膀胱内にHS-tk発現プラスミド100μg/0.1mlのみ注入しエレクトロポレーション施行しない群
3)エレクトロポレーション単独群:開腹し膀胱内に溶媒0.1mlを注入しエレクトロポレーションを施行した群
4)HS-tk遺伝子導入群:開腹し膀胱内にHS-tk発現プラスミド100μg/0.1ml注入しエレクトロポレーション法を施行した群
膀胱内への注入は膀胱内の尿を吸引し、頚部をクランプして溶媒またはプラスミドを26G針で注入した。エレクトロポレーション法は膀胱内注入直後に、幅1cmの電極で挟み込み(電極の間隔2mm)、50V、20msec、1Hz、4パルスの条件で電気刺激。極性を変えて再度電気刺激した。腹壁は閉創した。翌日より10日間、ガンシクロビル(GCV)10mg/1日1回を腹腔内投与(GCVはHS-tk遺伝子がつくり出すHS-tkにより細胞障害性発揮)。12日目に堵殺し、膀胱を摘出し、20%ホルマリンで固定、それぞれ同じスライスでHE染色とTUNEL染色を行い、necrosis、apoptosisの有無を検討することとした。現在、SRLへ委託して結果待ちの状態である。