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ブレオマイシン肺線維症のトリガー新規TGF-β遺伝子の働き

Research Project

Project/Area Number 14771283
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Biological pharmacy
Research InstitutionHiroshima University

Principal Investigator

熊谷 孝則  広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (70274058)

Project Period (FY) 2002 – 2003
Project Status Completed (Fiscal Year 2003)
Budget Amount *help
¥2,900,000 (Direct Cost: ¥2,900,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Keywordsブレオマイシン / 肺線維症 / Differential Display / Transforming growth factor / 5'-RACE / RT-PCR / transforming growth factor β
Research Abstract

ブレオマイシン(BLM)は、精巣癌などの治療に用いられる優れた抗癌剤であるが、副作用として重篤な肺線維症を引き起こすため、その使用には常に制限が伴う。これまで、ヒト肺正常線維芽細胞(WI-38)にBLMを投与した際に引き起こされる遺伝子発現の変化を、Differential Display(DD)法により調査した結果、transforming growth factor β(TGF-β)のsuperfamilyに属すると考えられる遺伝子の発現が昂進することを発見した。RT-PCRにより、BLM投与後、約3時間後から本遺伝子の発現が昂進することを明らかにしている。本研究では、本遺伝子とBLM肺線維症の関係を明らかにすることを目的とした。
DD法により得られた遺伝子は、その3'末端の一部の配列であったため、まず、全長型遺伝子を5'-RACE法によりクローニングすることを試みた。3'末端配列の情報に基づき、遺伝子特異的プライマー(GSP)を数種類作成後、Smart RACE cDNA Amplification Kit (Clontech)を用いて5'-RACEを行った結果、全長型遺伝子と考えられる断片を得ることができた。シークエンシングの結果、得られた遺伝子の3'末端配列は、TGF-β superfamily遺伝子と相同性を示したが、その5'側の配列はDatabase上の遺伝子と明確な相同性を示さなかった。現在、得られた全長型遺伝子を発現ベクターpcDNA 3.1(Invitrogen)に導入し、本遺伝子の過剰発現が線維芽細胞に及ぼす影響を調査している。また、得られた全長型遺伝子が目的の遺伝子でない場合も考慮し、5'-RACEによるクローニングも並行して行っている。

Report

(2 results)
  • 2003 Annual Research Report
  • 2002 Annual Research Report
  • Research Products

    (8 results)

All Other

All Publications (8 results)

  • [Publications] Matsuo, H.: "Molecular mechanism for the enhancement of arbekacin resistance in a methicillin-resistant Staphylococcus aureus"FEBS Letters. 546. 401-406 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Yuge, L.: "Cell differentiation and p38MAPK cascade are inhibited in human osteoblasts cultured in a three-dimensional clinostat"In Vitro Cellular and Developmental Biology. 39. 89-97 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Matsuo, H.: "Molecular cloning of a D-cycloserine resistance gene from D-cycloserine-producing Streptomyces garyphalus"Journal of Antibiotics. 56. 762-767 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Yuge, L.: "Physical stress by magnetic force accelerates differentiation of human osteoblasts"Biochemical and Biophysical Research Communications. 311. 32-38 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Kohashi, P.Y.: "An efficient method for the overexpression and purification of active tyrosinase from Streptomyces castaneoglobisporus"Protein Expression and Purification. 34. 202-207 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Sugiyama, M.: "The 1.6-Å crystal structure of the copper(II)-bound bleomycin complexed with the bleomycin-binding protein from bleomycin-producing Streptomyces verticillus"Journal of Biological Chemistry. 277. 2311-2320 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Sugiyama, M.: "Molecular and structural biology of bleomycin and its resistance determinants"Journal of Bioscience and Bioengineering. 93. 105-116 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Sugiyama, M.: "Streptomyces phospholipase A_2 : Its use in the enzymatic measurement of calcium(II) ion content"Actinomycetologica. 16. 17-20 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report

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Published: 2002-04-01   Modified: 2016-04-21  

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