| Project/Area Number |
14771283
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Biological pharmacy
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
熊谷 孝則 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (70274058)
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| Project Period (FY) |
2002 – 2003
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2003)
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| Budget Amount *help |
¥2,900,000 (Direct Cost: ¥2,900,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
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| Keywords | ブレオマイシン / 肺線維症 / Differential Display / Transforming growth factor / 5'-RACE / RT-PCR / transforming growth factor β |
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| Research Abstract |
ブレオマイシン(BLM)は、精巣癌などの治療に用いられる優れた抗癌剤であるが、副作用として重篤な肺線維症を引き起こすため、その使用には常に制限が伴う。これまで、ヒト肺正常線維芽細胞(WI-38)にBLMを投与した際に引き起こされる遺伝子発現の変化を、Differential Display(DD)法により調査した結果、transforming growth factor β(TGF-β)のsuperfamilyに属すると考えられる遺伝子の発現が昂進することを発見した。RT-PCRにより、BLM投与後、約3時間後から本遺伝子の発現が昂進することを明らかにしている。本研究では、本遺伝子とBLM肺線維症の関係を明らかにすることを目的とした。
DD法により得られた遺伝子は、その3'末端の一部の配列であったため、まず、全長型遺伝子を5'-RACE法によりクローニングすることを試みた。3'末端配列の情報に基づき、遺伝子特異的プライマー(GSP)を数種類作成後、Smart RACE cDNA Amplification Kit (Clontech)を用いて5'-RACEを行った結果、全長型遺伝子と考えられる断片を得ることができた。シークエンシングの結果、得られた遺伝子の3'末端配列は、TGF-β superfamily遺伝子と相同性を示したが、その5'側の配列はDatabase上の遺伝子と明確な相同性を示さなかった。現在、得られた全長型遺伝子を発現ベクターpcDNA 3.1(Invitrogen)に導入し、本遺伝子の過剰発現が線維芽細胞に及ぼす影響を調査している。また、得られた全長型遺伝子が目的の遺伝子でない場合も考慮し、5'-RACEによるクローニングも並行して行っている。
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