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HIVgp120結合タンパク質アクチノヒビンの結合糖鎖の解析

Research Project

Project/Area Number 14771313
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 医薬分子機能学
Research InstitutionKitasato University

Principal Investigator

千葉 春美  北里大学, 薬学部, 助手 (90276163)

Project Period (FY) 2002 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000)
Fiscal Year 2004: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2003: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Keywordsanti-HIV / Lectin / high mannose oliogosaccharide / glycoside cluster effect / lectin / high mannose oligosaccharide
Research Abstract

これまでにELISA法にてアクチノヒビン(AH)がHIV gp120上の高マンノース型糖鎖(HM)に結合すること、両者の結合がHMに含まれるα(1-2)結合マンノース(Man)によって阻害されることを報告した。本年度は、gp120発現細胞より調製したgp120を各種糖鎖切断酵素処理し、AHとの結合性を分子間相互作用解析装置(IAsys)で測定した。その結果、gp120をendo Hや1,2α-mannosidaseで処理することでAHとの結合性が失われることから、AHはgp120のHMに存在するα(1-2)結合Manを認識することが明らかとなった。AHのgp120との親和性について速度論的解析を行った結果、K_D=3.4×10^<-8>Mと非常に高い親和性を示した。一方、分子中に1つしかHMを持たないRNaseBに対してAHは結合性を示さなかった。フロンタルアフィニティークロマトグラフィー(FAC)によりフリーの糖鎖(α(1-2)mannobiose及びMan9)との親和性を解析した結果、AHとこれらの糖鎖との親和性はそれぞれK_D=5.8×10^<-4>および3.9×10^<-4>Mとなり、gp120との親和性に比べて非常に弱い結果となった。AHはその推定立体構造から3つの糖鎖結合部位を持つと考えられ、その1つを不活性化した変異体AHのフリー糖鎖に対する親和性をFACで測定した結果、K_D=4.5×10^<-4>Mとなり、ネイティブのAHとほぼ同程度であった。一方、変異体AHとgp120の親和性をELISA法で測定するとその結合率は1/10程度に減少した。以上の結果から、AHが持つ3つの糖鎖結合部位に糖タンパク質(GP)上の複数のHMが同時に結合することでクラスター効果が生じることが示唆された。生体内においては、gp120のように多数のHMをもつGPは数少なく、AHはHIVに選択的な感染予防薬となりうると考えられた。

Report

(3 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • 2002 Annual Research Report
  • Research Products

    (1 results)

All Other

All Publications (1 results)

  • [Publications] Chiba H., Inokoshi J., Nakashima H., Omura S., Tanaka H.: "Actinohivin, a novel anti-human immunodeficiency virus protein from an actinomycete, inhibits viral entry to cells by binding high-mannose type suger chains of gp120"Biochemical and Biophysical Research Communications. 316. 203-210 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report

URL: 

Published: 2002-04-01   Modified: 2016-04-21  

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