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ツメガエルデュプリンの機能解析

Research Project

Project/Area Number 14780556
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Developmental biology
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

福井 彰雅  東京大学, 大学院・総合文化研究科, 助手 (80262103)

Project Period (FY) 2002 – 2003
Project Status Completed (Fiscal Year 2003)
Budget Amount *help
¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
KeywordsWnt情報伝達系 / アフリカツメガエル / デュプリン / 軸形成 / 初期発生 / DNAヘリカーゼ
Research Abstract

duplin-short form(Xduls)の単離のため、3-prime RACEにより得られた情報をもとにspecific probeを設計し、これを用いて逆転写したcDNAをライブラリー化してクローニングを行った。約130000クローンの内一つがpositiveであり、これがXdulsの全長配列を含んでいた。新たに分かったXdulsのN末端側はすでに得られたツメガエルduplinと非常に高い相同性を示した。このXdulsとGFPのfusion constructを作製し、ツメガエル卵へ強制発現させて細胞内の局在を調べた結果、核にシグナルが見られた。これよりXdulsは核内移行することが分かった。XdulsのmRNAを合成し、4細胞期胚の異なる領域に微量注入してその結果を観察した。背側植物極へ注入した際は、頭部構造の欠損が見られた。背側動物極側へ注入した際、原腸陥入異常が見られ、背側に屈曲した幼生がみられた。腹側へXwnt-8と同時に注入することにより、Xwnt-8による2次軸形成を抑制した。この遺伝子の翻訳を阻害すると考えられるmorpholino antisense oligomerを設計し、背側動物極側へ注入した胚では、頭部構造の異常が見られた。また、Xdulsの作用部位を調べるため、この遺伝子のさまざまな欠失変異体を作製し、その活性を調べた。その結果、C末端側の塩基性アミノ酸クラスターがこの因子の活性に重要であることがわかった。以前の結果と共に、Xdulsは原腸胚期から発現が始まり、初期発生中には頭部形成と細胞の運動に関与すること、その活性には塩基性アミノ酸クラスターが重要であることが示された。

Report

(2 results)
  • 2003 Annual Research Report
  • 2002 Annual Research Report
  • Research Products

    (6 results)

All Other

All Publications (6 results)

  • [Publications] Kyuno, J., Fukui, A., Michiue, T., Asashima, M.: "Identification and characterization of Xenopus NDRG1."Biochemical and Biophysical Research Communications. 309. 52-57 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Fukui, A., Komazaki, S., Miyoshi, O., Asashima, M.: "Immunocytochemical study of activin type IB receptor (XALK4) in Xenopus oocytes."Development, Growth & Differentiation. 45. 113-119 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Kobayashi, M., Kishida, S., Fukui, A., Michiue, T., Miyamoto, Y., Okamoto, T., Yoneda, Y., Asashima, M., Kikuchi, A.: "Nuclear localization of Duplin, a beta-catenin-binding protein, is essential for its inhibitory activity on the Wnt signaling pathway"Journal of Biological Chemistry. 277. 5816-5822 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Sedohara, A., Fukui, A., Michiue, T., Asashima, M.: "Role of BMP-4 in the inducing ability of the head organizer in Xenopus laevis"Zoological Science. 19. 67-80 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Kadoya, T., Yamamoto, H., Suzuki, T., Yukita, A., Fukui, A., Michiue, T., et al.: "Desumoylation activity of Axam, a novel Axin-binding protein, is involved in downregulation of beta-catenin"Molecular and Cellular Biology. 22. 3803-3819 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report
  • [Publications] Koyano, S., Fukui, A., Uchida, S., Yamada, K., Asashima, M., Sakuragawa, N.: "Synthesis and release of activin and noggin by cultured human amniotic epithelial cells"Development Growth & Differentiation. 44. 103-112 (2002)

    • Related Report
      2002 Annual Research Report

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Published: 2002-04-01   Modified: 2016-04-21  

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