| Project/Area Number |
14780556
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Developmental biology
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
福井 彰雅 東京大学, 大学院・総合文化研究科, 助手 (80262103)
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| Project Period (FY) |
2002 – 2003
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2003)
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| Budget Amount *help |
¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
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| Keywords | Wnt情報伝達系 / アフリカツメガエル / デュプリン / 軸形成 / 初期発生 / DNAヘリカーゼ |
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| Research Abstract |
duplin-short form(Xduls)の単離のため、3-prime RACEにより得られた情報をもとにspecific probeを設計し、これを用いて逆転写したcDNAをライブラリー化してクローニングを行った。約130000クローンの内一つがpositiveであり、これがXdulsの全長配列を含んでいた。新たに分かったXdulsのN末端側はすでに得られたツメガエルduplinと非常に高い相同性を示した。このXdulsとGFPのfusion constructを作製し、ツメガエル卵へ強制発現させて細胞内の局在を調べた結果、核にシグナルが見られた。これよりXdulsは核内移行することが分かった。XdulsのmRNAを合成し、4細胞期胚の異なる領域に微量注入してその結果を観察した。背側植物極へ注入した際は、頭部構造の欠損が見られた。背側動物極側へ注入した際、原腸陥入異常が見られ、背側に屈曲した幼生がみられた。腹側へXwnt-8と同時に注入することにより、Xwnt-8による2次軸形成を抑制した。この遺伝子の翻訳を阻害すると考えられるmorpholino antisense oligomerを設計し、背側動物極側へ注入した胚では、頭部構造の異常が見られた。また、Xdulsの作用部位を調べるため、この遺伝子のさまざまな欠失変異体を作製し、その活性を調べた。その結果、C末端側の塩基性アミノ酸クラスターがこの因子の活性に重要であることがわかった。以前の結果と共に、Xdulsは原腸胚期から発現が始まり、初期発生中には頭部形成と細胞の運動に関与すること、その活性には塩基性アミノ酸クラスターが重要であることが示された。
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Report
(2 results)
Research Products
(6 results)
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[Publications] Kobayashi, M., Kishida, S., Fukui, A., Michiue, T., Miyamoto, Y., Okamoto, T., Yoneda, Y., Asashima, M., Kikuchi, A.: "Nuclear localization of Duplin, a beta-catenin-binding protein, is essential for its inhibitory activity on the Wnt signaling pathway"Journal of Biological Chemistry. 277. 5816-5822 (2002)
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[Publications] Kadoya, T., Yamamoto, H., Suzuki, T., Yukita, A., Fukui, A., Michiue, T., et al.: "Desumoylation activity of Axam, a novel Axin-binding protein, is involved in downregulation of beta-catenin"Molecular and Cellular Biology. 22. 3803-3819 (2002)
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[Publications] Koyano, S., Fukui, A., Uchida, S., Yamada, K., Asashima, M., Sakuragawa, N.: "Synthesis and release of activin and noggin by cultured human amniotic epithelial cells"Development Growth & Differentiation. 44. 103-112 (2002)
