棘皮動物オーガナイザー因子の同定

• Project/Area Number: 14780561
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Developmental biology
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 山本 卓 広島大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (90244102)
• Project Period (FY): 2002 – 2003
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2003)
• Budget Amount: ¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000); Fiscal Year 2003: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000); Fiscal Year 2002: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
• Keywords: 棘皮動物 / オーガナイザー / ウニ / 分泌性因子 / 誘導

Research Abstract

昨年シグナル配列トラップ法により選別した560個の酵母のクローンから、プラスミドDNAをPCR法により調製し、すべての塩基配列を決定した。塩基配列からシグナル配列を含むN末端のアミノ酸配列を予測し、その配列がシグナル配列である可能性をPsort programにより調べた。その結果、約50%クローンがシグナル配列を含む可能性が示され、酵母によるシグナル配列のスクリーニングは成功していることがわかった。さらに、その配列を用いてBlast searchにより既知の塩基配列との相同性を調べたところ、既知の分泌性酵素あるいは未知の分泌因子cDNAクローンとの相同性が確認された。これらのクローンのステージ別の発現量を調べるため、cDNAのPCR断片をフィルターにプロットしたマクロアレイフィルターを複数枚作製中である。また、プローブ用の各ステージ(未孵化胞胚期、間充織胞胚期、原腸胚期)の総RNAについてはすべてのステージで調製した。発現の局在を調べるために、解離した小割球特異的および大・中割球特異的なプローブについても合わせて調製した。
シグナル配列トラップ法でクローニングできるのは、タンパク質のN末端部分のみである。そのため、解析を進めていくために、全長cDNAをクローニングする必要がある。本年度は、孵化胞胚期と原腸胚期のRNAからそれぞれ約1000万の独立したcDNAクローンを含むプラスミドcDNAライブラリーを作製した。現在このライブラリーを用いて、興味深いクローンの全長cDNAをスクリーニングしている。

Research Products

• [Publications] Hayashibara Y., Mitsunaga K., et al.: "The Otx binding site is required for the activation of HpOtxL mRNA expression in the sea urchin, Hemicentrotus pulcherrimus"Development Growth & Differentiation. 46・1. 61-69 (2004)
• [Publications] Kurita M., Kondoh H., et al.: "Utilization of a particle gun DNA introduction system for the analysis of cis-regulatory elements controlling the spatial expression pattern of the arylsulfatase gene (HpArs) in sea urchin embryo"Development Genes and Evolution. 213. 44-49 (2003)
• [Publications] Yamamoto T., Yazawa T., et al.: "Low temperature promotes annexin V expression in newt testis"Zoological Science. 20. 733-735 (2003)
• [Publications] Yazawa T., Nakayama Y., et al.: "Abnormal spermatogenesis at low temperatures in the Japanese red-bellied newt, Cynops pyrrhogaster : possible biological significance of the cessation of spermatocytogenesis"Molecular Reproduction and Development. 66. 60-66 (2003)
• [Publications] Fuchikami, T., et al.: "T-brain homolog (HpTb) is involved in the archenteron induction signals of micromere descendant cells in the sea urchin embryo"Development. 129. 5205-5216 (2002)
• [Publications] Fujimoto, K., Yamamoto, T., Kitano, T., Abe, S.-I.: "Promotion of cathepsin L activity in newt spermatogonial apopotosis induced by prolactin"FEBS Lett. 521・1-3. 43-46 (2002)
• [Publications] Yazawa, T., Yamamoto, T., Jin Yan., Abe, S.-I.: "Follicle-stimulating hormone is indispensable for the last spermatogonial mitosis preceding meiosis initiation in newts (Cynops pyrrhogaster)"Biol Reprod. 66・1. 14-20 (2002)
• [Publications] Kurita, M., Kondoh, H., et al.: "Utilization of a particle gun DNA introduction system for the analysis of cis-regulatory elements controlling the spatial expression pattern of HpArs in sea urchin embryos"Dev Genes and Evol. 213・1. 44-49 (2003)
• [Publications] Yamamoto, T., Yazawa, T., Fujimoto, K., Kitano, T., Abe, S.-I.: "Low temperature promotes annexin V expression in newt testis"Zool Sci. (in press). (2003)
• [Publications] Yazawa, T., Nakayama, Y., Fujimoto, K., Matsuda, Y., Yamamoto, T.: "Abnormal Spermatogenesis at Low Temperatures in the Japanese Red-bellied Newt, Cynops pyrrhogaster : Possible Biological Significance of the Cessation of Spermatocytogenesis"Mol Reprod Dev. (in press). (2003)