| Project/Area Number |
14780631
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Biomedical engineering/Biological material science
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
山本 希美子 東京大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (00323618)
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| Project Period (FY) |
2002 – 2003
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2003)
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| Budget Amount *help |
¥3,800,000 (Direct Cost: ¥3,800,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2002: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
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| Keywords | 流れずり応力 / 血管内皮細胞 / P2Xレセプター / ノックアウトマウス / 機械的刺激感知 / ATP受容性チャネル |
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| Research Abstract |
P2X4のノックアウトマウスの作製と生理的・病理的意義の解析を以下の順に行った。
1)ES細胞への遺伝子導入と相同組替え体の解析
ターゲティングベクターをES細胞(TT2)にエレクトロポレーションにより遺伝子導入し、更にG418により遺伝子導入された細胞を選別した。クローン細胞の中からゲノムDNAを抽出し、サザンブロッティングにより相同組替えしたクローン細胞を選別し、5クローンの相同組み替え体を得た。
2)キメラマウスの作製
ターゲティングベクターを相同組替えしたES細胞のクローンをマウスの初期胚に導入し、得られた胚盤胞を擬妊娠ICRマウスに移植し、キメラマウスを作製した。他のICRマウスと交配させ、ジャームラインに乗っているキメラマウスを選別した。
3)ホモ遺伝子欠損マウスの作製
キメラマウスとC57/B6を交配させ、生まれたマウスのゲノムをサザンブロッティングにより解析し、ヘテロマウスを選別した。ヘテロマウスの雄と雌を交配させ、ホモ遺伝子欠損、ヘテロ遺伝子欠損、そして野生型マウスを得た。
4)表現型の解析
得られたマウスの組織・器官の表現型の違いを観察した。テールカフ方及び動脈挿管の直接測定による血圧の測定を行った所、ホモ遺伝子欠損マウスの血圧は収縮期血圧が有意に上昇した。これはCa^<2+>チャネルであるP2X4レセプター遺伝子が欠損した事により、NOによる血管拡張が起きにくくなったためと考えられる。また、in vivoにおける循環器系の観察及び、マウスから単離・培養した血管内皮細胞を用いたin vitroの実験系でP2X4を欠損させたことによる生理的・病理的な意義を検討した。
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