有鉤条虫の比較ゲノム解析に基づく組織指向性の解明および遊離型ＤＮＡ検査法の開発

• Project/Area Number: 14F04103
• Research Category: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 外国
• Research Field: Parasitology (including sanitary zoology)
• Research Institution: Asahikawa Medical College
• Principal Investigator: 迫 康仁 旭川医科大学, 医学部, 教授 (40312459)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): NKOUAWA AGATHE 旭川医科大学, 医学部, 外国人特別研究員 ; NKOUAWA Agathe 旭川医科大学, 医学部, 外国人特別研究員
• Project Period (FY): 2014-04-25 – 2016-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2015)
• Budget Amount: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000); Fiscal Year 2015: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2014: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
• Keywords: 有鉤条虫 / ゲノム解析 / DNA検出 / 血清 / DNA検出法 / マルチプレックスLAMP

Outline of Annual Research Achievements

有鉤嚢虫症はテニア科条虫に属する有鉤条虫の幼虫の寄生に起因し、時に脳に寄生することにより致死的病態を引き起こす。有鉤嚢虫症は、ラテンアメリカでは脳内寄生のみによるものが大多数であるのに対し、アジアでは、脳内と他組織（主に皮下、筋肉）への寄生によるものが通常である。このような病態の差異を生じさせる組織指向性に関して、なぜアメリカ分離株とアジア分離株間で異なっているのか明確な解答は得られていない。そこで、ゲノムの塩基配列を株間で比較することにより、組織指向性を規定する因子の探索を試みた。同時に、血清中の寄生虫由来DNA検出法の確立を試みた。
有鉤条虫のゲノム塩基配列を決定するために、タイ分離株では約12G、インドネシア分離株では約10Gの塩基配列データを取得することが出来た。アセンブルソフトAbyssならびにVelvetを用いてアセンブルを実施した結果、タイ分離株においては、Abyssでは最長鎖長820,191bp、velvetでは最長鎖長479,322bpの塩基配列が、インドネシア分離株においてはAbyssでは最長鎖長820,084bp、velvetでは最長鎖長479,322bpの塩基配列がアセンブルされた。今回得られた鎖長は短いため、全塩基配列を得るためにはさらなる塩基配列の取得が必要と考えられた。
有鉤嚢虫感染ブタの血清虫に寄生虫由来のDNAが存在するか否かを確認する必要があるが、有鉤嚢虫感染ブタ血清を日本で調整することはきわめて困難である。そこで、有鉤嚢虫と同様に血管外寄生する条虫である多包虫を用いて、血管外寄生虫由来DNAの血清からの検出を試みた。多包虫が腹腔内に寄生しているマウスから血液を経時的に採取し、血清中の多包虫由来DNAの有無をPCR法にて確認した。その結果、PCRを2回実施することにより、マウス血清からPCR産物を得ることが出来た。

Research Progress Status

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Simple identification of human Taenia species by multiplex loop-mediated isothermal amplification in combination with dot enzyme-linked immunosorbent assay. (2016)
  • Author(s): Nkouawa A, Sako Y, Okamoto M, Ito A
  • Journal Title: Am J Trop Med Hyg Volume: 94 Issue: 6 Pages: 1318-1323
  • DOI: 10.4269/ajtmh.15-0829
  • NAID: 120006325058
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Cryptic diversity in hymenolepidid tapeworms infecting humans (2016)
  • Author(s): Nkouawa A, Haukisalmi V, Li T, Nakao M, Lavikainen A, Chen X, Henttonen H, Ito A
  • Journal Title: Parasitol Int Volume: 65 Issue: 2 Pages: 83-86
  • DOI: 10.1016/j.parint.2015.10.009
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Seroprevalence and risk factors of human cysticercosis and taeniasis prevalence in a highly endemic area of epilepsy in Bangoua, west Cameroon (2015)
  • Author(s): Nkouawa A, Dschanou AR, Moyou-Somo R, Sako Y, Ito A
  • Journal Title: Acta Tropica Volume: 印刷中 Pages: 116-120
  • DOI: 10.1016/j.actatropica.2015.12.019
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Evaluation of a new immunochromatographic test using recombinant antigen B8/1 for the diagnosis of cystic echinococcosis (2015)
  • Author(s): Santivanez SJ, Rodriguez ML, Rodriguez S, Sako Y, Nkouawa A, Kobayashi Y, Sotomayor AL, Peralta JE, Valcarcel M, Gonzalez AE, Garcia HH, Ito A
  • Journal Title: J Clin Microbiol Volume: 53 Issue: 12 Pages: 3859-3863
  • DOI: 10.1128/jcm.02157-15
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Presentation] Development of a simple identification of human Taenia species by using multiplex LAMP and dot-ELISA (2015)
  • Author(s): Nkouawa Agathe、Ito Akira、Sako Yasuhito
  • Organizer: 64th American Society of Tropical Medicine & Hygiene Annual Meeting
  • Place of Presentation: Philadelphia, USA
  • Year and Date: 2015-10-25
• [Presentation] Development of a simple identification of human taenia species by using multiplex LAMP and dot-ELISA (2015)
  • Author(s): Nkouawa Agathe、迫 康仁
  • Organizer: 第８４回日本寄生虫学会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-03-21 – 2015-03-22