動物細胞内シグナル伝達におけるカルシウム応答性アダプタータンパク質の機能解析

• Project/Area Number: 14J09452
• Research Category: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 国内
• Research Field: Applied biochemistry
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 京 卓志 名古屋大学, 生命農学研究科, 特別研究員(DC1)
• Project Period (FY): 2014-04-25 – 2017-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2016)
• Budget Amount: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000); Fiscal Year 2016: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2015: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2014: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
• Keywords: タンパク質間相互作用 / カルシウム結合タンパク質 / 小胞輸送

Outline of Annual Research Achievements

申請書にって、カルシウム結合タンパク質ALG-2とTFGの相互作用が初期分泌経路において果たす役割を検討した。
昨年度までに、ALG-2の過剰発現によってTFGのERES局在が顕著になる結果が得られており、その効果とERストレス及びTFG発現量との関連を調べた。まず、ALG-2の過剰発現によって、ERストレスが惹起されるかを調べるために、ALG-2を過剰発現させた細胞のERストレスマーカーの発現量を調べた。ALG-2の過剰発現によってERストレスマーカーの発現が増加しなかったことから、ALG-2の過剰発現とERストレスとの関連は見出されなかった。次に、ALG-2過剰発現細胞におけるTFGの発現量をウエスタンブロッィングで調べた。しかし、ALG-2を過剰発現した細胞と過剰発現していない細胞間で、TFGの量の差はみられなかった。以上の結果から、TFGの局在に対するALG-2過剰発現の効果は、ERストレス及び、TFGの発現量の変化とは独立していることが考えられた。
続いて、TFGのさらなる機能解明に向けて、TFGの新規相互作用タンパク質の探索を行った。その結果、TFGの新規相互作用タンパク質候補としてTRAF3を同定した。GFP-TFGとHA-TRAF3を共発現させたHEK293細胞から溶解液を調製し、抗GFP抗体による免疫沈降を行った結果、HA-TRAF3が共沈降した。このことから、TRAF3はTFGと相互作用することが確認された。さらに、免疫染色を行った結果、ゴルジ体様の局在パターンである核の周囲において、GFP-TFGの蛍光シグナルとHA-TRAF3の免疫染色シグナルが部分的に一致した。以上の結果から、初期分泌経路においてTFGとTRAF3の相互作用が何らかの役割を果たす可能性が示唆された。

Research Progress Status

28年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

28年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] The calcium-binding protein ALG-2 promotes endoplasmic reticulum exit site localization and polymerization of Trk-fused gene (TFG) protein. (2017)
  • Author(s): Kanadome Takashi, Shibata Hideki, Kuwata Keiko, Takahara Terunao and Maki Masatoshi
  • Journal Title: The FEBS Journal Volume: 284 Issue: 1 Pages: 56-76
  • DOI: 10.1111/febs.13949
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] A New Role for Annexin A11 in the Early Secretory Pathway via Stabilizing Sec31A at the Endoplasmic Reticulum Exit Sites (ERES) (2015)
  • Author(s): Shibata Hideki, Kanadome Takashi, Sugiura Hirofumi, Yokoyama Takeru, Yamamuro Minami, Stephen E. Moss, Maki Masatoshi
  • Journal Title: J Biol Chem Volume: 2290 Issue: 8 Pages: 4981-4993
  • DOI: 10.1074/jbc.m114.592089
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] カルシウム結合タンパク質ALG-2はTFGの多量体化と細胞内局在を調節する (2016)
  • Author(s): 京卓志、桑田啓子、高原照直、牧正敏、柴田秀樹
  • Organizer: 日本細胞生物学会大会
  • Place of Presentation: 京都テルサ
  • Year and Date: 2016-06-15
• [Presentation] カルシウム結合タンパク質ALG-2による初期分泌経路調節タンパク質TFGの細胞内局在制御 (2016)
  • Author(s): 京卓志、桑田啓子、高原照直、牧正敏、柴田秀樹
  • Organizer: 日本農芸化学会２０１６年度札幌大会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター、札幌市産業振興センター
  • Year and Date: 2016-03-28
• [Presentation] カルシウム結合タンパク質ALG-2と小胞体―ゴルジ体間順行輸送調節タンパク質TFGの相互作用解析と局在観察 (2015)
  • Author(s): 京卓志、桑田啓子、高原照直、牧正敏、柴田秀樹
  • Organizer: 第８８回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] アポトーシス関連因子ALG-2とCDIP1の相互作用とアポトーシスへの関与 (2015)
  • Author(s): 鈴木 千尋、京 卓志、高原 照直、柴田 秀樹、牧 正敏
  • Organizer: 日本農芸化学会２０１５年度大会
  • Place of Presentation: 岡山大学津島キャンパス
  • Year and Date: 2015-03-27
• [Remarks] 名古屋大学大学院生命農学研究科分子細胞制御学研究分野ホームページ
• [Remarks] 名古屋大学大学院生命農学研究科分子細胞制御学研究分野ホームページ
  • URL: http://www.agr.nagoya-u.ac.jp/~mcr/