| Project/Area Number |
15024240
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Review Section |
Biological Sciences
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
大熊 芳明 大阪大学, 大学院・生命機能研究科, 助教授 (70192515)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
横井 雅幸 大阪大学, 大学院・生命機能研究科, 助手 (00322701)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2003
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2003)
|
| Budget Amount *help |
¥6,400,000 (Direct Cost: ¥6,400,000)
Fiscal Year 2003: ¥6,400,000 (Direct Cost: ¥6,400,000)
|
|---|
| Keywords | 基本転写因子 / TFIIE / TFIIH / RNAポリメラーゼII(Pol II) / 転写開始 / 転写伸長への移行 / Znフィンガー領域 / メディエーター複合体 |
|---|
| Research Abstract |
1.ヒトTFIIEαのZnフィンガーの機能解析
この領域の4個のシステインをアラニンに置換したC129A、C132A、C154A、C157Aと、グルタミン酸E140、アスパラギン酸D164をアラニン、リジンに置換したE140A、E140K、D164A、D164Kの点変異に関して、転写と他の基本転写因子との結合に関して解析した。その結果、ZnフィンガーのN末側は転写開始と伸長への移行の2段階に関わり、C末側は転写開始に機能する結果が得られた。他因子との相互作用を調べると、N末2変異はTFIIFβとの結合が強くなり、一方C末の2変異は、TFIIHのXPBサブユニットとの結合が減弱していたが、これらは転写結果を良く説明する。一方、酸性アミノ酸の点変異に関しては、転写がむしろ促進していた。特にD164Aは、転写活性が大きく増加してした。これら酸性領域には未知因子が機能している可能性が示唆され、今後これを検索していく。
2.分裂酵母TFIIEとRNAポリメラーゼII(PolII)の相互作用の解析
分裂酵母TFIIEの2サブユニットとPolIIサブユニットとの結合を調べたところ、TFIIEαはRpb5、βはRpb2とRpb12に強く結合した。PolIIは転写開始の際にその構造を変化させるが、その際に構造を変えるのは主にRpb5とRpb2である。これらに各々αとβサブユニットが結合することを我々が明らかにしたことで、転写の際にPolII活性中心近傍にTFIIEが結合するという事実と合わせ、この構造変化をTFIIE、特にそのαサブユニットが制御している可能性が考えられるに至った。
3.メディエーター複合体の解析
核内シグナル伝達に関わるメディエーターのサブユニットにタグを付け発現させるヒトHeLa細胞株を我々で確立し、これからメディエーターを精製したところ、3つのサブタイプからなることが分った。
|
