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エンドサイト-シス小胞形成のリアルタイム観察

Research Project

Project/Area Number 15657028
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Functional biochemistry
Research InstitutionOkayama University

Principal Investigator

竹居 孝二  岡山大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 教授 (40322226)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 山田 浩司  岡山大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 講師 (80325092)
李 順愛  岡山大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 助手 (30403497)
絹田 正裕  岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (40135942)
Project Period (FY) 2003 – 2005
Project Status Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help
¥2,900,000 (Direct Cost: ¥2,900,000)
Fiscal Year 2005: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Keywordsエンドサイトーシス / 小胞輸送 / 無細胞系 / ライブイメージング / リポソーム / ダイナミン / アンフィファシジン / ライブイメージグ
Research Abstract

ファゴサイトーシスの分子機構解明のために、セルトリ細胞を用いてファゴサイトーシスのリアルタイム観察を行った。まず、セルトリ細胞株SerW3にフォスファチジルセリン(PS)を認識する受容体(SR-B1)が発現していることをウエスタンブロットにより確認し、細胞膜における局在のパターンを蛍光免疫染色により明らかにした。次に、SerW3細胞によるPS含有大型リポゾーム取込みを経時的、定量的に調べることにより、セルトリ細胞のファゴサイトーシスが、SR-B1を介してPS依存性に起こることを明らかにした。SerW3細胞に、PS含有リポゾームあるいはPSで被覆したスチレンビーズを貪食させ、その様子を超高速共焦点レーザー顕微鏡下でリアルタイム観察したところ、ファゴサイトーシスにおけるpseudo pod形成に先立って糸状突起やラッフルの形成など、F-アクチンの再編成による細胞膜の形態変化が著明に認められた。PS刺激からアクチン重合、ラッフル形成にいたる経路には、フォスファチジルイノシトール3リン酸キナーゼ、Rac、cdc42が関与することが阻害剤を用いた実験により示された。GFP-アンフィファイジン1を発現させたSerW3細胞をライブイメージングにより観察すると、ラッフル形成に伴ってアンフィファイジン1がラッフルに集積する様子が認められた。SerW3細胞のアンフィファイジン1をRNAiによりノックダウンするとラッフル形成が抑制されたことから、アンフィファイジン1がファゴサイトーシス初期におけるアクチンフィラメントの再編成に関与することが示唆された。

Report

(3 results)
  • 2005 Annual Research Report
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • Research Products

    (14 results)

All 2005 2004 Other

All Journal Article (10 results) Publications (4 results)

  • [Journal Article] A human beta-cell line for transplantation therapy to control type 1 diabetes2005

    • Author(s)
      M.Narushima
    • Journal Title

      Nature Biotechnology 23

      Pages: 1274-1282

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Stimulation of Dynamin GTPase Activity by Amphiphysin2005

    • Author(s)
      Y.Yoshida
    • Journal Title

      Methods in Enzymology 404

      Pages: 528-537

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Regulatory mechanisms of dynamin-dependent endocytosis2005

    • Author(s)
      K.Takei
    • Journal Title

      Journal of Biochemistry 137

      Pages: 243-247

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Regulatory mechanisms of dynamin-dependent endocytosis2005

    • Author(s)
      K.Takei
    • Journal Title

      J Biochemistry 137

      Pages: 2005-2005

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Dynamin and endocytosis.2004

    • Author(s)
      K.Takei
    • Journal Title

      蛋白質核酸酵素 49

      Pages: 938-941

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      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Immunohistochemical localization of Klotho protein in brain, kidney, and reproductive organs of mice2004

    • Author(s)
      S-A.Li
    • Journal Title

      Cell Struct. Funct 29

      Pages: 91-99

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Immunohistochemical localization of Klotho protein in brain, kidney, and reproductive organs of mice2004

    • Author(s)
      S-A.Li
    • Journal Title

      Cell Structure and Function 29

      Pages: 91-99

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  • [Journal Article] Dynamin-2 regulates oxidized low-density lipoprotein-induced apoptosis of vascular smooth muscle cell2004

    • Author(s)
      Y.Kashiwakura
    • Journal Title

      Circulation 110

      Pages: 3329-3334

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] The stimulatory action of amphiphysin on dynamin function is dependent on lipid bilayer curvature2004

    • Author(s)
      Y.Yoshida
    • Journal Title

      EMBO Journal 23

      Pages: 3483-3491

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      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] ダイナミンとエンドサイトーシス2004

    • Author(s)
      竹居孝二
    • Journal Title

      蛋白質 核酸 酵素 増刊『細胞における蛋白質の一生』 49

      Pages: 938-941

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      2004 Annual Research Report
  • [Publications] K.Tomizawa: "Cophosphorylation of amphiphysin I and dynamin I by Cdk5 regulates clathrin-mediated endocytosis of synaptic vesicles"Journal of Cell Biology. 163. 813-824 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] M.Krauss: "ARF6 stimulates clathrin/AP-2 recruitment to synaptic membranes by activating phosphatidylinositol phosphate kinase type Iγ"Journal of Cell Biology. 162. 113-124 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] 絹田 正裕: "イノシトールリン脂質によるエンドサイトーシスの制御機構"生化学. 75. 1449-1452 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] 竹居 孝二: "蛋白質 核酸 酵素"ダイナミンとエンドサイトーシス(印刷中). (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report

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Published: 2003-04-01   Modified: 2016-04-21  

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