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In vivo RNAiによる遺伝子ノックダウンマウス作出と薬物動態研究への応用

Research Project

Project/Area Number 15659036
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Medical pharmacy
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

高倉 喜信  京都大学, 薬学研究科, 教授 (30171432)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 西川 元也  京都大学, 薬学研究科, 助教授 (40273437)
Project Period (FY) 2003 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000)
Fiscal Year 2004: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2003: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
KeywordsRNA干渉 / 遺伝子ノックダウン / トランスポーター / P-Glycoprotein / siRNA / siRNA発現ベクター / ハイドロダイナミクス法 / in vivo / ルシフェラーゼ / in vitro / p-糖タンパク
Research Abstract

2本鎖RNAを用いた特定遺伝子の発現抑制は、RNA干渉(RNA interference:以下RNAi)と呼ばれるが、線虫において最初に報告され、効率よく配列特異的な遺伝子のノックダウンが可能であることが示された。その後、改良法の適用によりRNAiの誘導が培養哺乳類細胞においても可能であることが発見され、極めて有用性の高い遺伝子機能解析ツールとしてにわかに注目を集めている。本研究は、RNAiをマウス個体レベルで実現する方法を確立し、薬物動態を支配する重要な機能分子であるトランスポーターや薬物代謝酵素の遺伝子をin vivoでノックダウンしたマウスの作出を目指す。昨年度はホタルルシフェラーゼを外来のモデル標的遺伝子に選択してRNAiの評価を行ない、マウスの系において水溶液の形で高容量(1.6ml/mouse)、高速(5秒以内)で静脈内投与するハイドロダイナミクス法を利用することで、in vivoで外来遺伝子のノックダウンが可能であることを明らかにした。そこで本年度は、内因性の標的遺伝子標的として肝実質細胞に発現している薬物排出トランスポーターP-Glycoprotein (P-gp)を選択し、標的塩基配列に相補的な合成の短い二本鎖RNA(siRNA)およびsiRNA発現プラスミドベクターを設計した。これらをマウス静脈内にハイドロダイナミクス法により投与した結果、mRNAレベルが有意に低下することが明らかとなった。また、ウエスタンブロッティングによるタンパクレベルでの評価においても低下していることが示され、in vivoにおける内因性の標的遺伝子をノックダウンできる可能性が示唆された。

Report

(2 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2004 Other

All Journal Article (2 results) Publications (1 results)

  • [Journal Article] Hydrodynamics-based procedure involves transient hyperpermeability in the hepatic cellular membrane : inplication of a nonspecific process in efficient intracellular gene delivery2004

    • Author(s)
      Naoki Kobayashi et al.
    • Journal Title

      Journal of Gene Medicine 6(5)

      Pages: 584-592

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Hepatic delivery of particulates in the submicron range by a hydrodynamics-based procedure : implications for particulate gene delivery systems2004

    • Author(s)
      Naoki Kobayashi et al.
    • Journal Title

      Journal of Gene Medicine 6(4)

      Pages: 455-463

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Publications] Naoki Kobayashi et al.: "Vector-Based in vivo RNA Interference : Dose-and Time-Dependent Suppression of transgene Expression"Journal of Pharmacology and Experimantal Therapeutus. 308(2). 688-693 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report

URL: 

Published: 2003-04-01   Modified: 2016-04-21  

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