遺伝子治療のための染色体複製起点由来のエピゾームベクターの開発に関する研究
| Project/Area Number |
15659072
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
General medical chemistry
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research |
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Principal Investigator |
正井 久雄 財団法人東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 副参事研究員 (40229349)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
須賀田 直子 財団法人東京都医学研究機構, 主任研究員 (30344071)
林田 敏郎 財団法人東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 研究員 (20342925)
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| Project Period (FY) |
2003 – 2004
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2004)
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| Budget Amount *help |
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Fiscal Year 2003: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
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| Keywords | エピゾームベクター / 遺伝子治療 / ORC / 複製起点 / 複製開始複合体 / MCM / EBウィルス / oriP |
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| Research Abstract |
遺伝子治療において、遺伝子導入に用いるベクターとしては、主に、ウィルスに由来したベクターが用いられているが、一長一短があり、種々の改良がなされている。一方、ウィルスに由来しない毒性の低い、自律複製能を有するエピソームベクターは、動物細胞ではまだ開発されていない。我々は、真核細胞の複製開始機構に基づいて、複製開始複合体を特定の配列にtargetすることにより、より効率良く複製複合体の構築をおこない、強い自律複製能を有するエピゾームベクターの開発を計画した。
この目的のために、本年度は、分裂酵母ORCのDNA結合ドメインであるORC4のDNA結合ドメインをヒトORC4のN端に融合した分裂酵母-ヒトキメラORC4(Sp-huORC4)を作製し、動物細胞内で発現した。さらにこのplasmid上に、分裂酵母ORC4の標的配列であるAT-rich複製起点配列を導入した。このplasmidを現在動物細胞に導入し、一過性に自律的に複製できるかどうかを検討した。現在、さらに効率よく複製し、安定に維持されるベクターの開発をすすめている。
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Report
(2 results)
Research Products
(13 results)
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[Journal Article] A second human Dbf4/ASK-related protein, Drf1/ASKL1 is required for efficient completion of S and M phases.2005
Author(s)
Yoshizawa, N., Ishii, A., Taniyama, C., Matsui, E., Arai, K., Masai, H.
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Journal Title
J.Biol.Chem. 280
Pages: 13062-13070
Related Report
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[Journal Article] Functional analysis of mouse ASK, an activator subunit for Cdc7 kinase, using conditional ASK knockout ES cells.2005
Author(s)
Yamashita, N., Kim, J-M., Koiwai, O., Arai, K., Masai, H.
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Journal Title
Genes to Cells (In press)
Related Report
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[Journal Article] Functional interaction between tumor suppressor menin and activator of S-phase kinase.2004
Author(s)
Schnepp, R.W., Hou, Z., Wang, H., Petersen, S., Silva, A., Masai, H., Hua, X.
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Journal Title
Cancer Res. 64
Pages: 6791-6796
Related Report
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[Journal Article] Overexpression of CR/periphilin downregulates Cdc7 expression and induces S-phase arrest.2004
Author(s)
Kurita, M., Suzuki, H., Masai, H., Mizumoto, K., Ogata, E., Nishimoto, I., Aiso, S., Matsuoka, M.
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Journal Title
Biochem.Biophys.Res.Commun. 32
Pages: 554-561
Related Report
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[Publications] Sato, N., Sato, M., Nakayama, M., Saitoh, R., Arai, K., Masai, H.: "Cell cycle regulation of chromatin binding and nuclear localization of Cdc7-ASK kinase complex"Genes to Cells. 8. 451-463 (2003)
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[Publications] You, Z., Ishimi, Y., Mizuno, T., Sugasawa, K., Hanaoka, F., Masai, H.: "Thymine-rich single-stranded DNA sequences specifically activate mouse Mcm4/6/7 helicase on Y-fork and bubble-like substrates."EMBO Journal. 22. 6148-6160 (2003)
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[Publications] Furukohri, A., Sato, N., Masai, H., Arai, K., Sugino, A., Waga, S.: "Identification and characterization of a Xenopus homolog of dbf4, a regulatory subunit of the cdc7 protein kinase required for the initiation of DNA."Journal of Biological Chemistry (Tokyo). 134. 447-457 (2003)
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