特異な変異を有するWiskott-Aldrich症候群患者の解析と治療への応用

• Project/Area Number: 15659242
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Pediatrics
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 久間木 悟 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (20311566)
• Project Period (FY): 2003 – 2004
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2004)
• Budget Amount: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000); Fiscal Year 2004: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000); Fiscal Year 2003: ¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
• Keywords: Wiskott-Aldrich症候群 / 原発性免疫不全症 / second site mutation / WASP蛋白

Research Abstract

1.T細胞の一部にWASP蛋白を発現するWiskott-Aldrich症候群患者の解析と治療
(1)我々が樹立した抗WASP抗体を用いた細胞内染色により、Wiskott-Aldrich症候群のスクリーニングを実施し、細胞内にWASP蛋白を発現する患者を同定した。その中に分子量の軽いWASP蛋白を発現するWAS患者が存在した。この患者にみられたnonsense変異と開始コドン(ATG)に第2変異を併せ持つ変異WASP遺伝子を単離し、各々のcDNAを発現ベクターに載せた。このベクターをWASP蛋白の発現していない繊維芽細胞に発現させ、産生される分子量の大きさを比較検討した。その結果、開始コドン(ATG)に第2変異を併せ持つ変異WASP遺伝子では第2開始コドンであるATGから、蛋白が読まれていた。この変異WASP蛋白質はT細胞受容体からのシグナル伝達を促進するNckと結合できるのみならず、逆にシグナルを抑制するWIPとも結合できることを示した。以上より上記変異WASP蛋白質は機能的であることを示した。
(2)本症例の末梢血単核球の細胞内染色を行ったところ、約半数のCD4陽性細胞と大多数のCD8陽性細胞でWASP蛋白質の発現が認められたが、T細胞受容体のレパトア解析ではskewingがみられた。このことから、この患者で検出された分子量の軽いWASP蛋白はT細胞増殖には機能的であるが、完全なレパトア形成には不十分であることが示された。
(3)正常WASP遺伝子を含むレトロウイルスベクターも作成しており、上記変異WASPが発現している患者細胞に正常WASPを同時に発現させた場合にシグナル伝達をドミナントネガティブに抑制しないかどうかを検討し、遺伝子治療の安全性を確認している。
2.WAS患者およびXLT患者の遺伝子診断については、患者及びその親権者に対して事前に十分な説明を行った上で、自由意思に基づく同意(インフォームドコンセント)を文書で得ている。

Research Products

• [Journal Article] X-linked severe combined immunodeficiency syndrome : the first Korean case with γc chain gene mutation and subsequent genetic counseling. (2004)
  • Author(s): Jo EK, et al.
  • Journal Title: J Korean Med Sci. 19 Pages: 123-126
• [Journal Article] Refractory autoimmune hemolytic anemia in a patient with chromosome 22q11.2 deletion syndrome. (2004)
  • Author(s): Sakamoto O, et al.
  • Journal Title: Pediatr Int 46 Pages: 612-614
• [Journal Article] Characterization of a novel nonsense mutation in the IL-7Rα gene in a Korean patient with severe combined immunodeficiency. (2004)
  • Author(s): Jo EK, et al.
  • Journal Title: Int J Hematol 80 Pages: 332-335
• [Journal Article] A novel JAK3 mutation in a Japanese patient with severe combined immunodeficiency.
  • Author(s): Uchiyama T, et al.
  • Journal Title: Pediatr Int (In press)
• [Publications] Kobayashi N, et al.: "Novel Artemis gene mutations of radiosensitive severe combined immunodeficiency in Japanese families."Hum Genet. 112. 348-352 (2003)
• [Publications] Imai K, et al.: "Hyper-IgM syndrome type 4 with a B lymphocyte-intrinsic selective deficiency in Ig class-switch recombination."J Clin Invest. 112. 136-142 (2003)
• [Publications] Itoh T, et al.: "A simple controlled-rate freezing method without a rate-controlled programmed freezer provides optimal conditions for both large-scale and small-scale cryopreservation of umbilical cord blood cells."Transfusion. 43. 1303-1308 (2003)
• [Publications] Imashuku S, et al.: "Lack of clinical utility of minimal residual disease detection in allogeneic stem cell recipients with childhood acute lymphoblastic leukemia : multi-institutional collaborative study in Japan."Bone Marrow Transplant. 31. 1127-1135 (2003)
• [Publications] Jo EK, et al.: "X-linked severe combined immunodeficiency syndrome : the first Korean case with γc chain gene mutation and subsequent genetic counseling."J Korean Med Sci.. 19. 123-126 (2004)
• [Publications] Kettner A, et al.: "WIP Regulates Signaling via the High Affinity Receptor for Immunoglobulin E in Mast Cells."J Exp Med. 199. 357-368 (2004)