| Project/Area Number |
15659295
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
General surgery
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
宮川 周士 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (90273648)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮澤 孝幸 (宮沢 孝幸) 帯広畜産大学, 畜産学部, 助教授 (80282705)
福田 大輔 株式会社ニプロ, 総合研究所, 研究員
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| Project Period (FY) |
2003 – 2004
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2004)
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| Budget Amount *help |
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
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| Keywords | PERV / シュードタイプアッセイ法 / ブタ血管内皮細胞 / siRNA / H1 promoter / 糖転移酵素 / 遺伝子導入 / env蛋白 |
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| Research Abstract |
<PERVの制御法の検討>
1.各種糖鎖プロセシング阻害薬を用い、PERV表面のN結合型糖蛋白の高マンノース型糖鎖がヒト細胞への感染に関与することを証明した。
2.次に、PERV-Bを強発現させた、独立した3系統のブタ血管内皮細胞(PEC)に、N結合型糖鎖のプロセシングに関わるα-mannosidase lb (Man lb)とN-Acetylglucosaminyltransferase l (GnT-l)およびmockを遺伝子導入した。これらの細胞由来のPERVを293細胞へ感染させ、感染細胞数の変化をnls-Lac(Z)pseudotype assayにて検討した。Manlb群の感染細胞数は、mock群に比して、それぞれ#1:33%,#2:30%,#3:29%と低下していた。Gnt-l群でも、#1:25%,#2:44%,#3:18%と低下していた。
<siRNAによるPERVの制御>
pBlueにpCX/GFPとpSUPER (H1 promoter)を組み込んだcassette vector : pSXGHを作成し、これにgag領域に対するsiRNAを組み込んだ(pSXGH-siRNA)。PERV-Bを強発現させたブタ血管内皮細胞(PEC)にこのvectorを遺伝子導入し、transient cell lineと、さらに数個のstable cloneを樹立した。これらの細胞由来のPERVをヒト胎児腎(HEK293)細胞へ感染させ、感染細胞数の変化をnls-Lac(Z) pseudotype assayにて検討した。1.Mockにたいして、iRNA群(transient cell line)では#1:36%,#2:39%と有意に低下していた。2.Cloneでは、mock cloneに対し#5:26%,#6:14%,#12:15%と低下していた。
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