• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to previous page

ミトコンドリア病態モデルマウスを利用した核移植による発生工学的治療法の開発

Research Project

Project/Area Number 15700317
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Laboratory animal science
Research InstitutionThe Institute of Physical and Chemical Research

Principal Investigator

井上 貴美子  独立行政法人理化学研究所, 遺伝工学基盤技術室, 研究員 (70360500)

Project Period (FY) 2003 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
KeywordsミトコンドリアDNA / ミトコンドリア病 / 核移植 / マウス / 第1極体 / 電気融合法 / 注入法
Research Abstract

本年度は、ミトコンドリアDNA (mtDNA)の含有量が少ないと推測される第1極体の核移植を行い、産仔を得ることに成功した。第1極体は第一減数分裂時に放出される構造物であり、その細胞質内には雌の染色体が含まれており、遺伝情報としては卵子と等価である。また、放出後には退行する運命にあるため、その細胞質成分は貧しく、ミトコンドリアの含有量も少ないことが期待される。一方で、その退行していくという性質から、非常に細胞膜が壊れやすく、核移植のドナーとしては利用が困難である。そこで、第1極体を効率的な核ドナーとして使用すべく、様々な培養条件下で移植方法を探索した。
ここまでのところ、以下の条件が最も適していることが分かっている。
1.採卵方法採卵はGV卵期に行い、試験管内成熟(IVM)を行う。採卵とIVMを行う培地は浸透圧の高いTYH培地を使用し、卵丘細胞をはずした裸化卵子として培養を行うと、第1極体が退行しにくいことが明らかとなった。
2.融合方法採卵12時間後、第1極体の移植を行う。核移植法は第2減数分裂期卵子をサイトカラシン存在下で除核した後、センダイウイルスによって行う。電気パルスによる融合は極体へのダメージが大きく、退行が早まってしまうため第1極体の移植方法としては適していない。
3.受精方法体外受精(IVF)は卵丘細胞裸化卵子を用いた受精率が低いこと、除核や融合による膜へのダメージが受精率に影響を与えることから、この方法には適していないことが明らかとなった。一方顕微授精(ICSI)による方法は翌日の分割率が高く、確実な受精が行える。
以上の方法を採用して、これまでに第1極体を核ドナーとした産仔が7.4%の割合で得られた(2/27:産仔数/移植胚数)。現在、これらのマウスを用いて、未受精卵子の核移植により得られたマウスと核移植由来mtDNAの含有量を比較している。

Report

(2 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • Research Products

    (13 results)

All 2005 2004 Other

All Journal Article (6 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results) Publications (5 results)

  • [Journal Article] 割球分断クローン、受精卵クローン、体細胞クローンの相違について2005

    • Author(s)
      井上貴美子, 小倉淳郎
    • Journal Title

      綜合臨牀 54

      Pages: 24-29

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Generation of pluripotent stem cells from neonatal mouse testis2004

    • Author(s)
      M.Kanatsu-Shinohara, K.Inoue
    • Journal Title

      Cell 119

      Pages: 1001-1012

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Cytoplasmic asters are required for progression past the first cell cycle in cloned mouse embryos2004

    • Author(s)
      H.Miki, K.Inoue, et al.
    • Journal Title

      Biology of Reproduction 71

      Pages: 2022-2028

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Microinsemination with first-wave round spermatid from immature male mice2004

    • Author(s)
      H.Miki, J.Lee, et al.
    • Journal Title

      Journal of Reproduction and Development 50

      Pages: 131-137

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Tissue-specific distribution of donor mitochondrial DNA in cloned mice produced by somatic cell nuclear transfer2004

    • Author(s)
      K.Inoue, N.Ogonuki, et al.
    • Journal Title

      Genesis 39

      Pages: 79-83

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Long-term culture of mouse male germline stem cells under serum- or feeder-free conditions

    • Author(s)
      Kanatsu-Shinohara M, Miki H, et al.
    • Journal Title

      Biology of Reproduction (in press)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Book] 実験医学別冊2004

    • Author(s)
      井上貴美子, 小倉淳郎
    • Total Pages
      231
    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] クローン哺乳動物の作成方法2004

    • Inventor(s)
      若尾 宏 他4名
    • Industrial Property Rights Holder
      若尾 宏 他4名
    • Industrial Property Number
      2004-238836
    • Filing Date
      2004-08-18
    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Publications] Inoue, K., Ogonuki, N., Mochida, K., Yamamoto, Y., Takano, K., Kohda, T., Ishino.F., Ogura, A.: "Effects of Donor Cell Type and Genotype on the Efficiency of Mouse Somatic Cell Cloning."Biology of Reproduction. 69. 1394-1400 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Inoue, K., Ogonuki, N., Yamamoto, Y., Takano, K., Miki, H., Mochida, K., Ogura, A.: "Tissue-specific distribution of donor mitochondrial DNA in cloned mice produced by somatic cell nuclear transfer."Genesis. (in press). (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Kanatsu-Shinohara, M., Ogonuki, N., Inoue, K., Miki, H., Ogura, A., Toyokuni, S., Shinohara, T.: "Long-Term Proliferation in Culture and Germline Transmission of Mouse Male Germline Stem Cells."Biology of Reproduction. 69. 612-616 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Kanatsu-Shinohara, M., Ogonuki, N., Inoue, K., Ogura, A., Toyokuni, S., Shinohara.T.: "Restoration of fertility in infertile mice by transplantation of cryopreserved male germline stem cells."Human Reproduction. 18. 2660-2667 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Miki, H., et al.: "Microinsemination with first-wave round spermatids from immature male mice."Journal of Reproduction and Development. 50. 131-137 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report

URL: 

Published: 2003-04-01   Modified: 2016-04-21  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi