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高等植物のみに存在する2種類の新規A型DNAポリメラーゼの機能解析

Research Project

Project/Area Number 15770031
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 植物生理・分子
Research InstitutionTokyo University of Science

Principal Investigator

木村 成介  東京理科大学, 理工学部, 助手 (40339122)

Project Period (FY) 2003 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
Fiscal Year 2004: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
KeywordsPolI-like / 葉緑体 / DNA修復 / DNA複製 / 植物 / OsPolI-1ike / A型DNAポリメラーゼ / 高等植物 / DNA
Research Abstract

高等植物のみに存在する新規のA型DNAポリメラーゼ2種類(PolI-like AとPolI-like B)の機能解明することを目的とし研究を進めた。本年度においてはGFP融合蛋白質の一過性発現による細胞局在の解析と、DNAに損傷を与えた時の発現応答の解析を中心に研究を進めた。
まず、シロイヌナズナの2種類のA型DNAポリメラーゼ、AtPolI-like AとAtPolI-like Bの翻訳領域の全長とN末端の部分をそれぞれGFPのN末もしくはC末に融合させるコンストラクトを作成した。ベクターはCaMV35S-sGFP(S65T)-nos3'を用いた。コンストラクトをパーティクルガンを用いてタマネギの表皮細胞またはタバコの培養細胞BY-2に導入した。12時間生地することで融合蛋白質を一過性発現させ、蛍光顕微鏡で観察した。その結果AtPolI-like Aは葉緑体に、AtPolI-like Bは葉緑体及びミトコンドリアに局在している可能性が示唆された。
次に両遺伝子とDNA修復の関連性を明らかにするために、DNAに傷害を与える紫外線、メタンスルホン酸メチル、過酸化水素水処理により両遺伝子の発現が誘導されるかどうかRT-PCRにより調査した。その結果、AtPolI-like Aの発現が過酸化水素水処理で処理により誘導されることが分かった。今後両遺伝子の解析を進めて行くことで、葉緑体DNA複製・修復におけるA型DNAポリメラーゼの機能が明らかになることが期待される。

Report

(2 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • Research Products

    (12 results)

All 2006 2005 2004 Other

All Journal Article (6 results) Publications (6 results)

  • [Journal Article] DNA repair in plants2006

    • Author(s)
      Kimura S, Sakaguchi K
    • Journal Title

      Chemical Reviews (印刷中)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] The expression of the rice (Oryza sativa L.) homologue of Snm1 is induced by DNA damages2005

    • Author(s)
      Kimura S et al.
    • Journal Title

      Biochemical and Biophysical Research Communications (印刷中)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] 高等植物のDNA修復機構2005

    • Author(s)
      木村, 石橋, 山本, 坂口
    • Journal Title

      生化学 (印刷中)

    • NAID

      10015547726

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Arabidopsis COP10 forms a complex with DDB1 and DET1 in vivo and enhance the activity of ubiquitin conjugating enzymes2004

    • Author(s)
      Yanagawa et al.
    • Journal Title

      Genes & Development 18

      Pages: 2172-2181

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Plant DNA polymerase λ, a DNA repair enzyme which functions in plant meristematic and meiotic tissues2004

    • Author(s)
      Uchiyama et al.
    • Journal Title

      European Journal of Biochemistry 271

      Pages: 2799-2807

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] DNA repair in higher plants; photoreactivation is the major DNA repair pathway in non-proliferating cells while excision repair (nucleotide excision repair and base excision repair) is active in proliferating cells2004

    • Author(s)
      Kimura et al.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Research 32

      Pages: 2760-2767

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Publications] Yamamoto T. et al.: "Characterization of Rad6 from a higher plant, rice (Oryza sativa L.) and its interaction with Sgt1, a subunit of the SCF ubiquitin ligase complex"Biochemical and Biophysical Research Communications. 314. 434-439 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Yamamoto T. et al.: "Degradation of proliferating cell nuclear antigen by 26S Proteasome in the Oryza sativa strain of rice"Planta. 印刷中.

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Yamaguchi T. et al.: "Expression of flap endonuclease-1 during meiosis in a basidiomycete, Coprinus cinereus"Fungal Genetics and Biology. 印刷中.

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Kimura et al.: "Functional characterization of two flap endonuclease-1 (FEN-1) homologues in rice"GENE. 314. 63-71 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Furukawa et al.: "OsSEND-1 : a new Rad2 nuclease family member in higher plant"Plant Molecular Biology. 51. 59-70 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Ishibashi et al.: "Rice UV-DDB homologues are most abundant in proliferating tissues"Gene. 308. 79-87 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report

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Published: 2003-04-01   Modified: 2016-04-21  

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