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蛋白質生合成を翻訳レベルで調節するヘム関連キナーゼのX線結晶構造解析

Research Project

Project/Area Number 15780066
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Applied biochemistry
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

黒河 博文  東北大学, 多元物質科学研究所, 助手 (80359546)

Project Period (FY) 2003 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥3,800,000 (Direct Cost: ¥3,800,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2003: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
KeywordsX線結晶構造解析 / ヘムセンサー / ホスホジエステラーゼ / タンパク質
Research Abstract

近年、ヘムやヘムリガンド(酸素分子、一酸化炭素、一酸化窒素等)の濃度変化を感知して、これを細胞シグナルへと変換するヘムセンサーと呼ばれる新しいヘムタンパク質ファミリーが次々と見つかり、注目を浴びている。本研究では、未だ不明であるヘムセンサータンパク質のセンシング機構を解明するため、いくつかのヘムセンサータンパク質について結晶構造解析を行った。
本研究ではまず、ストレス(ヘム濃度低下)に応答してmRNAから蛋白質への翻訳を阻害するheme-regulated eIF-2α kinase(HRI)に着目した。HRIは基質である翻訳制御因子(eIF-2α)をリン酸化することによって、mRNAから蛋白質への翻訳を阻害するキナーゼであり、そのN末端領域(約140残基)がヘム結合部位としてストレスセンサーとして働いていると考えられている。HRIの分子内シグナル伝達の初期段階での構造変化を解明するために、HRIのN未端ヘム結合ドメインのX線結晶構造解明を目指し、そのN末端ドメインの結晶化を試みた。様々な結晶化スクリーニングキットと結晶化用恒温装置を用いた4℃と25℃での条件検索により、ヘム結合状態において、微結晶を得ることができた。その後結晶化の最適条件をスクリーニングしているが、X線結晶構造に適した大きな結晶を調整するには至っていない。
また、本研究では大腸菌のヘムセンサータンパク質であるヘム制御ホスホジエステラーゼ(EcDOS)のヘムセンサードメインの結晶化も並行して行い、その結晶化に成功した。そして、活性型の還元型、不活性型の酸化型の両方についてその構造解析に世界で初めて成功した。高分解能の結品構造解析から、ヘムの酸化還元状態の違いによってヘムリガインドの交換が起こり、これがのEcDOSヘムセンサードメインの三次元構造を変化させていることが明らかとなった。この構造変化がホスホジエステラーゼの活性制御に関わっていることが強く示唆された。

Report

(2 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2004

All Journal Article (3 results)

  • [Journal Article] A Redox-controlled Molecular Switch Revealed y the Crystal Structure of a Bacterial Heme PAS Sensor2004

    • Author(s)
      H.Kurokawa
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry 279

      Pages: 20186-20193

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Fluorescence Spectral Studies of Trp53Phe and Trp110Ile Mutants of a Heme-regulated Phosphodiesterase from Escherichia coli2004

    • Author(s)
      S.Hirata
    • Journal Title

      Chemistry Letter 33

      Pages: 870-871

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Critical roles of Asp40 at the haem proximal side of haem-regulated phosphodiesterase from Escherichia coli in redox potential, auto-oxidation and catalytic control2004

    • Author(s)
      M.Watanabe
    • Journal Title

      European Journal of Biochemistry 271

      Pages: 3937-3942

    • Related Report
      2004 Annual Research Report

URL: 

Published: 2003-04-01   Modified: 2016-04-21  

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