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ホスホリパーゼC及びDの活性に及ぼす脂質ホスト膜のパッキングストレスの新規評価法

Research Project

Project/Area Number 15790026
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Physical pharmacy
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

中野 実  京都大学, 薬学研究科, 助手 (70314226)

Project Period (FY) 2003 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
Fiscal Year 2004: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2003: ¥2,700,000 (Direct Cost: ¥2,700,000)
Keywords両連続キュービック / ラメラ / レシチン / モノオレイン / 蛍光 / パッキングストレス / フォスフォリパーゼD / 両親媒性ペプチド / 逆ヘキサゴナル / X線小角散乱 / リポソーム / キュボソーム
Research Abstract

リン脂質の2本のアシル鎖(炭素数10)の末端にピレンを有するDipyrenylPCが、その2つのピレン基間の距離に応じてエキシマー蛍光を発することを利用し、Palmitoyloleoylphosphatidylcholine (PC)とMonoolein (MO)の水和脂質混合物に生じるパッキングストレスの評価を行った。脂質混合物中のピレン蛍光のエキシマー/モノマー蛍光強度比はMOの割合の増加と共に増加し、ラメラ-キュービック相転移直前で最大となった。また、キュービック相への転移により減少し、キュービック相においては蛍光強度比は脂質組成に依存しなかった。この結果は、前年度に行った蛍光プローブDPH-PAの時間分割蛍光異方性測定の結果とも対応しており、ラメラ相において負の曲率を与える脂質MOが増加すると、アシル鎖領域の側方圧力が増加し、相転移と共に緩和されることが示された。
膜脂質を基質とする酵素反応におけるパッキングストレスの影響を評価するため、PC/MO混合リポソーム膜に対するフォスフォリパーゼD(PLD)の反応を酵素電極法を用いて追跡した。MOを0〜50mol%含むリポソームに対するPLDのPC加水分解反応のKmおよびVmaxは脂質組成に依存しなかったが、相転移に近い組成である、MOを60%含む膜に対してはKm,Vmaxともに減少した。このことから、アシル鎖領域のパッキングストレスが大きくなると脂質極性基付近での反応にも影響を与えるようになることが示唆された。さらに、両親媒性ペプチド18Aの膜への結合親和性がPC膜に比べPC/MO混合膜のほうが高いことがゲル濾過クロマトグラフィの結果から明らかとなった。

Report

(2 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • Research Products

    (6 results)

All 2005 2004 2003 Other

All Journal Article (5 results) Publications (1 results)

  • [Journal Article] Formation of ceramide-enriched domains in lipid particles enhances the binding of apolipoprotein E2005

    • Author(s)
      S.Morita, M.Nakano, A.Sakurai, Y.Deharu, A.V-Doi, T.Handa
    • Journal Title

      FEBS Letters 579/7

      Pages: 1759-1764

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Detection of Bilayer Packing Stress and Its Release in Lamellar-Cubic Phase Transition by Time-Resolved Fluorescence Anisotropy2005

    • Author(s)
      M.Nakano, T.Kamo, A.Sugita, T.Handa
    • Journal Title

      Journal of Physical Chemistry B 109/10

      Pages: 4754-4760

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Interaction of Cubosomes with Plasma Components Resulting in the Destabilization of Cubosomes in Plasma2004

    • Author(s)
      W.Leesajakul, M.Nakano, A.Taniguchi, T.Handa
    • Journal Title

      Colloids and Surfaces B : Biointerfaces 34/4

      Pages: 253-258

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Ceramide in Lipid Particles Enhances Heparan Sulfate Proteoglycan and Low Density Lipoprotein Receptor-Related Protein-Mediated Uptake by Macrophages2004

    • Author(s)
      S.Morita, M.Kawabe, A.Sakurai, K.Okuhira, A.V-Doi, M.Nakano, T.Handa
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry 279/23

      Pages: 24355-24361

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Nonlamellar Liquid Crystalline Phases and Their Particle Formation in the Egg Yolk Phosphatidylcholine/Diolein System2003

    • Author(s)
      T.Kamo, M.Nakano, W.Leesajakul, A.Sugita, H.Matsuoka, T.Hands
    • Journal Title

      Langmuir 19/22

      Pages: 9191-9195

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Publications] T.Kamo, M.Nakano, W.Leesajakul, A.Sugita, H.Matsuoka, T.Handa: "Nonlamellar Liquid Crystalline Phases and Their Particle Formation in the Egg Yolk Phosphatidylcholine/Diolein System"Langmuir. 19/22. 9191-9195 (2003)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report

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Published: 2003-04-01   Modified: 2016-04-21  

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