プロテオーム解析技術を用いた膵がんの転移に関わるタンパク質の探索

• Project/Area Number: 15790212
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Experimental pathology
• Research Institution: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• Principal Investigator: 近藤 格 国立がんセンター(研究所及び東病院臨床開発センター), 生物学部, 室長 (30284061)
• Project Period (FY): 2003 – 2005
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2005)
• Budget Amount: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000); Fiscal Year 2005: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2004: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2003: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: プロテオーム解析 / 膵がん細胞 / 蛍光二次元電気泳動法(2D-DIGE法) / データマイニング / 抗体 / 血漿 / プロテオミクス / 膵癌 / 二次元電気泳動 / 2D-DIGE / 腫瘍マーカー / 転移 / 質量分析 / データベース

Research Abstract

平成17年度は次のような研究を行った。
1)膵がんの転移に重要な働きを示すマトリックス・メタロプロテアーゼ(Matrix metalloproteinase、以下MMP)の基質となっているタンパク質を蛍光二次元電気泳動で探索する。2)市販されている特異抗体を用いて膵がん患者の血清タンパク質を調べる。1)においては、膵がん細胞の転移能や膵がん患者の予後と発現が相関することが報告されているMMP-2,MP-7,MMP-9と細胞から抽出したタンパク質を反応させ、反応前後のタンパク質スポットの変化を蛍光二次元電気泳動法で調べた。MMPによって切断されたタンパク質はスポット濃度が減少するし、濃度が増加するスポットは切断の結果として生じるタンパク質のフラグメントであると判断できる。濃度が変化したスポットをいくつか同定し、スポットに対応するタンパク質は質量分析で決定した。同定されたタンパク質の中にはMMPと発現レベルが相関することが知られているタンパク質、膵がん以外の悪性腫瘍で悪性度に関わることが報告されているタンパク質が含まれていたが、いずれもMMPの基質となることは知られていなかった。特にがんとの関わりが報告されているタンパク質に関して実験結果をWestern blottingで確認している。今後、切断によって生じるタンパク質の機能や腫瘍組織中での発現レベルなどを調べる計画である。2)については、市販されている特異抗体(合計232種類)を使い、Western blottingで膵がん患者9名、健常者9名の血漿を調べた。18種類の抗体が血漿タンパク質と反応し、うち5種類の抗体が膵がん患者血漿で異常な反応性を示していた。5種類の抗体に対応するタンパク質の中には、がん関連タンパク質として白血病患者の予後と発現が強く相関することが報告されているタンパク質が短くなったものが含まれていた。

Research Products

• [Journal Article] Database of two-dimensional polyacrylamidegel electrophoresis of proteins labeled with CyDye DIGE Fluor saturation dye. (2006)
  • Author(s): Fujii K, Kondo T, Yokoo H, Okano T, Yamada M, Yamada T, Iwatsuki K, Hirohashi S.
  • Journal Title: Proteomics 6(5) Pages: 1640-1653
• [Journal Article] Protein expression pattern distinguishes different lymphoid neoplasmas. (2005)
  • Author(s): Fujii K, Kondo T, Yokoo H, Yamada T, Iwatsuki K, Hirohashi S.
  • Journal Title: Proteomics 5(16) Pages: 4274-4286
• [Journal Article] Two-dimensional electrophoresis database of fluorescence-labeled proteins of colon cancer cells. (2005)
  • Author(s): Mori Y, Kondo T, Yamada T, Tsuchida A, Aoki T, Hirohashi S.
  • Journal Title: J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 823(2) Pages: 82-97
  • NAID: 10016979820
• [Journal Article] Proteomic signatures for histological types of lung cancer. (2005)
  • Author(s): Seike M, Kondo T, Fujii K, Okano T, Yamada T, Matsuno Y, Gemma A, Kudoh S, Hirhashi S.
  • Journal Title: Proteomics 5(11) Pages: 2939-2948
• [Journal Article] Proteomic study of human hepatocelluar carcinoma using two-dimensional difference gel electrophoresis with saturation cysteine dye. (2005)
  • Author(s): Fujii K, Kondo T, Yokoo H, Yamada T, Iwatsuki K, Hirohashi S.
  • Journal Title: Proteomics 5(5) Pages: 1411-1422
• [Journal Article] Proteomic study of human hepatocellular carcinoma using two-dimensional difference gel elctrophoresis with saturation cysteine dye (2005)
  • Author(s): Fujii, K, Kondo, T, Yokoo, H, Yamada, T, Iwatsuki, K., Hirohashi, S.
  • Journal Title: Proteomics 5 Pages: 1411-1422
• [Journal Article] Proteomic study of human hepatocellular carcinoma using two-dimensional difference gel electrophoresis with saturation cysteine dye. (2004)
  • Author(s): Yokoo H, Kondo T, Fujii K, Yamada T, Todo S, Hirohashi S.
  • Journal Title: Hepatology 40 Pages: 609-617
• [Journal Article] Proteomic signature of human cancer cells (2004)
  • Author(s): Seike M, Kondo T, Fujii K, Yamada T, Gemma A, Kudoh A, Hirohashi S.
  • Journal Title: Proteomics 4 Pages: 2776-2788
• [Journal Article] Application of sensitive fluorescent dyes in linkage of laser microdissection and two-dimensional gel electrophoresis as a cancer proteomic study tool. (2003)
  • Author(s): Kondo T, Seiko M, Mori Y, Fujii K, Yamada T, Hirohashi S.
  • Journal Title: Proteomics 3 Pages: 1758-1766
• [Book] 疾患プロテオミクスの最前線 (2005)
  • Author(s): 近藤 格
  • Total Pages: 395
  • Publisher: メディカルドゥ
• [Book] 疾患プロテオミクスの最前線 (2005)
  • Author(s): 近藤格
  • Total Pages: 395
  • Publisher: メディカルドゥ
• [Publications] Kondo T, Seike M et al.: "Application of sensitive fluorescence dyes in a linkage of laser microdissection and two-dimensional gel electrophoresis as a tool for cancer proteomic study"Proteomics. 3. 1758-1766 (2003)
• [Publications] Seike M, Kondo T et al.: "Proteomic signature of human cancer cells"Proteomics. (In press).
• [Publications] 近藤格: "決定版プロテオーム解析マニュアル(磯辺俊明、高橋信弘)"羊土社.