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新しいグリコサミノグリカン二糖解析方法-古典的二糖化法と、現代的検出法との融合-

Research Project

Project/Area Number 15H00583
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 基礎医学
Research InstitutionShimane University

Principal Investigator

長子 晴美  島根大学, 医学部, 技術専門職員

Project Period (FY) 2015
Project Status Completed (Fiscal Year 2015)
Budget Amount *help
¥400,000 (Direct Cost: ¥400,000)
Fiscal Year 2015: ¥400,000 (Direct Cost: ¥400,000)
Keywordsグリコサミノグリカン / 質量分析 / 化学的二糖化
Outline of Annual Research Achievements

昨年までの研究で、グリコサミノグリカン(GAG)の多様な構造を解析するためにすべてのクラスのGAG二糖を質量分析により網羅的に解析する方法を確立したが、次のような要改善点に気づいた。
(1)測定条件を変更することにより、分析時間を短縮する。
(2)4クラスに特異的な酵素(コンドロイチナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ヘパリチナーゼ、ケラタナーゼ)で二糖化していたが、酵素を必要としない古典的な二糖化法である亜硝酸を用いる方法(化学的二糖化法)により、すべてのクラスを網羅的に解析する系を作る。
(3)酵素による二糖化法ではエピマー部分が不飽和化されるため、コンドロイチン硫酸とデルマタン硫酸は区別できなかった。化学的二糖化法では異性体として異なる二糖が生じるので、カラムからの溶出時間が異なれば区別することができると思われる。
これらの問題点を克服するため検討を重ね、以下のような結果を得た。
(1)分離時の温度と流速を上げ、さらにカラム長を短くすることで、25分の系を7分に短縮できた。
(2)長鎖GAGから作成した化学的二糖化法による二糖(標品は市販されていない)の推定されるイオンが検出できた。
(3)検出されたイオンのMS/MSを行って、同定するためのチャネルを作成した。
(4)作成したチャネルを用いて分析すると、長鎖デルマタン硫酸からはコンドロイチン硫酸とは異なる溶出時間にピークが検出され、エピマーを区別できる可能性が示唆された。
(5)ブタ関節軟骨由来のGAGを化学的二糖化し解析すると、酵素による二糖化で同定されたのと同じ二糖に由来すると思われるピークが検出できた。
研究結果の一部を「第63回質量分析総合討論会」、「第40回日本医用マススペクトル学会年会」、「第30回日本整形外科学会基礎学術集会」、「第88回日本生化学会大会」にて発表し、「第38回生理学技術研究会」において招待講演し、まとめた。

Report

(1 results)
  • 2015 Annual Research Report
  • Research Products

    (7 results)

All 2016 2015 Other

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 1 results) Presentation (5 results) (of which Invited: 1 results)

  • [Journal Article] Rat Articular Cartilages Change Their Tissue and Protein Compositions During Perinatl Period.2015

    • Author(s)
      Kobayashi-Miura M, Miura T, Osago H, Yamaguchi Y, Aoyama T, Tanabe T, Matsumoto KI, Fujita Y.
    • Journal Title

      Anatomia Histologia Embryologia

      Volume: in press Issue: 1 Pages: 9-18

    • DOI

      10.1111/ahe.12165

    • Related Report
      2015 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Glycosaminoglycans detection methods : applications of tandem mass spectrometry

    • Author(s)
      Kubaski F., Osago H., Mason R. W., Yamaguchi S., Tsuchiya M., Tomatsu S.
    • Journal Title

      Frontiers in Bioscience

    • Description
      印刷中
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 新しいグリコサミノグリカン二糖解析方法-古典的二糖化法と、現代的検出法との融合-2016

    • Author(s)
      長子 晴美
    • Organizer
      第38回生理学技術研究会 第27回生物学技術研究会
    • Place of Presentation
      自然科学研究機構(岡崎市)
    • Year and Date
      2016-02-18
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
    • Invited
  • [Presentation] ラット支持組織におけるグリコサミノグリカン組成の比較2015

    • Author(s)
      長子晴美、三浦美樹子、原 伸正、日吉峰麗、土屋美加子
    • Organizer
      第88回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド(神戸市)
    • Year and Date
      2015-12-01
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 質量分析による腰椎黄色靭帯のグリコサミノグリカン解析2015

    • Author(s)
      河野通快、長子晴美、土屋美加子、松崎雅彦、内尾祐司
    • Organizer
      第30回日本整形外科学会基礎学術集会
    • Place of Presentation
      富山国際会議場(富山市)
    • Year and Date
      2015-10-22
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] ヒト靭帯におけるグリコサミノグリカンの解析2015

    • Author(s)
      長子晴美、原 伸正、日吉峰麗、河野通快、内尾祐司、土屋美加子
    • Organizer
      第40回日本医用マススペクトル学会年会
    • Place of Presentation
      アクトシティ浜松(浜松市)
    • Year and Date
      2015-09-17
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 確認イオン比を利用したGAG二糖異性体の一斉定量解析2015

    • Author(s)
      長子晴美、原 伸正、日吉峰麗、河野通快、内尾祐司、土屋美加子
    • Organizer
      第63回質量分析総合討論会
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場(つくば市)
    • Year and Date
      2015-06-17
    • Related Report
      2015 Annual Research Report

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Published: 2015-04-16   Modified: 2016-12-27  

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