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新規核酸医薬基盤技術への展開を志向したRNA化学修飾反応の開発とその機能評価

Research Project

Project/Area Number 15J03430
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Research Field Drug development chemistry
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

實崎 大地  九州大学, 薬学府, 特別研究員(DC2)

Project Period (FY) 2015-04-24 – 2017-03-31
Project Status Declined (Fiscal Year 2016)
Budget Amount *help
¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 2016: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2015: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Keywords核酸化学 / RNA化学修飾 / 遺伝情報編集 / 核酸医薬品 / RNA / 人工核酸
Outline of Annual Research Achievements

本研究では、研究代表者がこれまでに開発したRNAの部位特異的修飾法(官能基転移反応)を基盤として、アンチセンス法やsiRNAとは異なる新たな核酸医薬研究のアプローチとしてmRNAの部位特異的化学修飾によるコドン情報を変化させる(遺伝情報編集技術)技術の確立を目的とした。
官能基転移反応によるmRNAを標的とした部位特異的修飾および修飾mRNAが翻訳過程に与える影響を明らかとする手法の確立を目指し、人工mRNAを用いた評価系の構築を検討した。本検討では、人工mRNAの3'側下流領域に存在する標的シトシン部位に対して官能基転移反応、引き続くin vitro translation行い、得られたタンパク質に対し、His-Tag精製、enterokinaseによる処理を行うことで、標的シトシン部位を含むコドンから翻訳された部位を含む短鎖ペプチドを単離しMALDI-TOFMSで検出することに成功した。しかしながら、コード改変による変異を検出することは達成できなかった。この理由として、長鎖RNAに対する官能基転移反応が進行していなかった可能性が考えられたため、RNase Hおよびchimera probeを用いた官能基修飾mRNAの検出・定量法の開発を続いて行うこととした。この手法では、官能基転移反応標的RNA領域の3'および5'側配列に対して2'-OMe/DNAプローブとRNase Hを反応させ、RNAを選択的に切断し、得られた官能基修飾RNA断片をPAGE分析することでバンドシフトより修飾RNAの検出・定量を期待した。現在、本手法でのRNA選択的切断と検出は達成されており、今後は官能基修飾RNA断片の検出・定量を目指す。また、長鎖RNAに対する官能基転移反応による化学修飾の検出・定量が達成された後、前述した人工mRNAの評価系でコドン改変の評価を行う予定である。

Research Progress Status

翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。

Report

(1 results)
  • 2015 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2016 2015

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Site-specific modification of the 6-amino group ofadenosine in RNA by an inter-strand functionality-transfer reaction using an S-functionalized-4-thiothymidine2015

    • Author(s)
      Oshiro I. Jitsuzaki D. Onizuka K. Nishimoto A. Taniguchi Y. and Sasaki S
    • Journal Title

      ChemBioChem,

      Volume: 16 Issue: 8 Pages: 1190-1198

    • DOI

      10.1002/cbic.201500084

    • Related Report
      2015 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] 塩基・部位特異的RNA化学修飾能を持つ官能基転移核酸による遺伝情報制御法の開発2016

    • Author(s)
      大城郁也
    • Organizer
      日本薬学会第136回年会
    • Place of Presentation
      日本、神奈川、横浜
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 金属応答性ピリミジン型機能性核酸を用いたアデニン選択的RNA修飾法の開発2015

    • Author(s)
      大城郁也
    • Organizer
      第25回万有福岡シンポジウム
    • Place of Presentation
      日本、福岡、博多
    • Related Report
      2015 Annual Research Report

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Published: 2015-11-26   Modified: 2024-03-26  

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