Regulatory mechanism for timely DARS2 activation

• Project/Area Number: 15K18479
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Molecular biology
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: KASHO Kazutoshi 九州大学, 薬学研究院, 助教 (90726019)
• Research Collaborator: MAYANAGI Kota 九州大学, 生体防御医学研究所 附属生体多階層システム研究センター, 助教
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2017-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2016)
• Budget Amount: ¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000); Fiscal Year 2016: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2015: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000)
• Keywords: DNA複製 / 核様体蛋白質 / IHF / 細胞周期 / DnaA / 染色体複製 / 大腸菌 / DARS2

Outline of Final Research Achievements

Chromosomal DNA replication is rigidly regulated to initiate only once per cell cycle. In Escherichia coli, initiation regulation is sustained by multiple regulatory systems for the initiator DnaA and the unique replication origin oriC. A nucleoid protein IHF binds to oriC and other regulatory DNA factors datA and DARS2, and regulates DnaA activity and initiation timing. First, I found some candidates for IHF regulator through in vitro proteomic search. In addition, I revealed that DNA supercoiling plays a significant role in regulating datA-IHF binding and that chromosomal DARS2 position, in a central region between oriC and the termination site, is important for timely initiation (Kasho et al, 2016 Genes Cells.; 2017 J Biol Chem.).

Research Products

• [Journal Article] Cooperative DnaA binding to the negatively supercoiled datA locus stimulates DnaA-ATP hydrolysis (2017)
  • Author(s): Kazutoshi Kasho, Hiroyuki Tanaka, Ryuji Sakai, Tsutomu Katayama
  • Journal Title: J. Biol. Chem. Volume: 292 Issue: 4 Pages: 1251-1266
  • DOI: 10.1074/jbc.m116.762815
  • NAID: 120005971209
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Chromosomal location of the DnaA-reactivating sequence DARS2 is important to regulate timely initiation of DNA replication in Escherichia coli (2016)
  • Author(s): Yukie Inoue, Hiroyuki Tanaka, Kazutoshi Kasho, Kazuyuki Fujimitsu, Taku Oshima, Tsutomu Katayama
  • Journal Title: Genes Cells Volume: 21 Issue: 9 Pages: 1015-1023
  • DOI: 10.1111/gtc.12395
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] Regulation of timely replication initiation by a nucleoid protein IHF on DnaA activating and inactivating DNA elements, DARS2 and datA in Escherichia coli. (2016)
  • Author(s): Kasho, K., Inoue, Y., Oshima, T., Fujimitsu, K., and Katayama, T.
  • Organizer: 10th 3R symposium
  • Place of Presentation: ホテル一畑（島根県松江市）
  • Year and Date: 2016-11-13
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 核様体蛋白質IHFと特異的なDNA部位との複合体形成・解離による複製開始タイミング制御 (2016)
  • Author(s): 加生 和寿、大島 拓、片山 勉
  • Organizer: 日本遺伝学会第88回大会
  • Place of Presentation: 日本大学国際関係学部三島駅北口校舎（静岡県三島市）
  • Year and Date: 2016-09-07
• [Presentation] 大腸菌染色体datA配列による複製開始蛋白質DnaA不活性化機構のDNA超らせんに応じた制御の解析 (2016)
  • Author(s): 加生 和寿、田中 宏幸、酒井 隆至、片山 勉
  • Organizer: 平成２８年度日本生化学会九州支部例会
  • Place of Presentation: 鹿児島大学郡元キャンパス（鹿児島県鹿児島市）
  • Year and Date: 2016-05-14
• [Presentation] 大腸菌染色体datA領域による複製開始蛋白質DnaAの不活性化機構は DNA超らせん構造依存的に制御される (2015)
  • Author(s): 加生 和寿、田中 宏幸、片山 勉
  • Organizer: 第３８回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド （兵庫県神戸市）
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] 大腸菌の複製起点における複製開始複合体の形成と複製タイミング調節因子の集合の動的な制御 (2015)
  • Author(s): 加生 和寿、村谷 周悟、毛谷村 賢司、片山 勉
  • Organizer: 第２３回 DNA 複製・組換え・修復ワークショップ
  • Place of Presentation: 焼津グランドホテル（静岡県焼津市）
  • Year and Date: 2015-10-19
• [Presentation] 大腸菌染色体上のdatA 領域によるDnaA 不活性化の新たな制御；DNA 超らせん構造による促進 (2015)
  • Author(s): 加生 和寿、田中 宏幸、片山 勉
  • Organizer: 第15回薬学研究院若手セミナー
  • Place of Presentation: 九州大学医系地区コラボステーションII（福岡県福岡市）
  • Year and Date: 2015-09-08
• [Remarks] 分子生物薬学分野ホームページ
  • URL: http://bunsei.phar.kyushu-u.ac.jp
• [Remarks] 分子生物薬学分野ホームページ
  • URL: http://bunsei.phar.kyushu-u.ac.jp/