ウイルスベクターによる高感度HBV複製検出系を用いたcccDNA生成機序の解析

• Project/Area Number: 15K19105
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Virology
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 近藤 小貴 東京大学, 医科学研究所, 助教 (80451871)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2017-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2016)
• Budget Amount: ¥3,900,000 (Direct Cost: ¥3,000,000、Indirect Cost: ¥900,000); Fiscal Year 2017: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2016: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2015: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
• Keywords: B型肝炎ウイルス / アデノウイルスベクター / cccDNA合成阻害 / ウイルスゲノム複製

Outline of Annual Research Achievements

B型肝炎ウイルス(HBV)の複製ゲノムであるcccDNA(covalently closed circular DNA)は既存の治療法で標的となっていないため、HBV保因者から完全に排除することは未だ困難である。HBVは動物モデルが確立しておらず、培養細胞でのゲノム複製効率は極めて低いため解析が難しい。特にcccDNA生成過程の詳細は明らかとなっていない。本研究では、肝細胞への遺伝子導入効率が特に高いアデノウイルス(Ad)ベクターを用いて培養細胞でのゲノム複製を高効率に検出する系の確立を目指し、本系を用いて我々が既に同定しているcccDNAの生成に失敗する変異体等の変異型HBVゲノムにおけるゲノム複製を詳細に解析することでcccDNA生成に必要なゲノム領域や因子を同定し、cccDNA生成阻害薬への応用を最終目的として研究を行っている。
そのために本研究ではアデノウイルス(Ad)ベクターを用いた新たな高感度HBV複製ゲノム検出系を確立し、本年度論文として報告を行った（Suzuki et al., Sci. Rep., 2017)。この系を用いて複数の変異型HBVゲノムを用いて解析を行うことで今まで複製効率、検出感度が低く詳細が明らかとなっていないcccDNA生成のメカニズムを解明することを想定していたが、本年度は産前、産後及び育児休暇等の取得により研究を行うことが困難となったため、研究費の申請は行わなかった。

Research Products

• [Journal Article] Efficient genome replication of hepatitis B virus using adenovirus vector: a compact pregenomic RNA-expression unit (2017)
  • Author(s): Suzuki M., Kondo S., Yamasaki M., Matsuda N., Nomoto A., Suzuki T., Saito I., Kanegae Y.
  • Journal Title: Scientific Reports Volume: 3 Pages: 1-1
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Establishment of a tamoxifen-inducible Cre-driver mouse strain for widespread and temporal genetic modification in adult mice (2016)
  • Author(s): Hirotake Ichise, Akiko Hori, Seiji Shiozawa, Saki Kondo, Yumi Kanegae, Izumu Saito, Taeko Ichise, and Nobuaki Yoshida
  • Journal Title: Experimental Animals Volume: 65 Issue: 3 Pages: 231-244
  • DOI: 10.1538/expanim.15-0126
  • NAID: 130006882370
  • ISSN: 0007-5124, 1341-1357, 1881-7122
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Preferable sites and orientations of transgene inserted in the adenovirus vector genome : The E3 site may be unfavorable for transgene position (2015)
  • Author(s): M Suzuki, S Kondo, Z Pei, A Maekawa, I Saito and Y Kanegae
  • Journal Title: Gene Therapy Volume: 1 Issue: 5 Pages: 1-9
  • DOI: 10.1038/gt.2014.124
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] Cas9高発現アデノウイルスベクター及び多数guide RNA同時発現によるゲノム編集効率の至適化とその応用 (2015)
  • Author(s): 前川 文、近藤 小貴、鈴木 まりこ、斎藤 泉、鐘ヶ江 裕美
  • Organizer: 日本分子生物学会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド（兵庫・神戸）
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] “HBV-Adシステム”を用いた効率的なHBVゲノム複製 (2015)
  • Author(s): 鈴木まりこ、近藤小貴、山﨑学、斎藤泉、柴崎正勝、鐘ヶ江裕美
  • Organizer: 日本分子生物学会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド（兵庫・神戸）
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] Efficient production of the replicating HBV genome using adenovirus vector (2015)
  • Author(s): 近藤小貴、鈴木まりこ、山﨑学、柴崎正勝、斎藤泉、鐘ヶ江裕美
  • Organizer: 日本ウイルス学会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡県・福岡市）
  • Year and Date: 2015-11-22
• [Presentation] Improvement of the method to detect the replicating HBV genome in the cells infected with adenovirus vector expressing pregenomic RNA (2015)
  • Author(s): Mariko Suzuki, Saki Kondo, Manabu Yamasaki, Yumi Kanegae, Masakatsu Shibasaki, Izumu Saito
  • Organizer: International meeting on the molecular biology of Hepatitis B viruses
  • Place of Presentation: Dolce Bad Nauheim (Germany)
  • Year and Date: 2015-10-04
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Multiplex guide RNAs targeting HBV genome expressed using adenovirus vector improve the efficiency of CRISPR/Cas9 system (2015)
  • Author(s): Aya Maekawa, Saki Kondo, Mariko Suzuki, Izumu Saito, Yumi Kanegae
  • Organizer: International meeting on the molecular biology of Hepatitis B viruses
  • Place of Presentation: Dolce Bad Nauheim (Germany)
  • Year and Date: 2015-10-04
  • Int'l Joint Research