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特異的γセクレターゼ阻害剤を用いた活性型プレセニリン複合体の調節機構の解析

Research Project

Project/Area Number 16015243
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionNiigata University

Principal Investigator

池内 健  新潟大学, 脳研究所, 助手 (20372469)

Project Period (FY) 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥3,100,000 (Direct Cost: ¥3,100,000)
Fiscal Year 2004: ¥3,100,000 (Direct Cost: ¥3,100,000)
Keywordsアルツハイマー病 / プレセニリン / セクレターゼ / プロテアーゼ / 阻害剤 / 遷移状態アナログ
Research Abstract

1.分子プローブとしての特異的γセクレターゼ阻害剤の作成
γセクレターゼを選択的に阻害する遷移状態アナログ型阻害剤,L-685,458にbenzophenoneおよびbiotinを付加した阻害剤(L-852,505)およびBODIPY-FLを付加した阻害剤(BODIPY-L658,458)を作成した.
2.L-852,505を用いたプレセニリン(PS)複合体の生化学的解析
野生型PS1安定発現株にL-852,505を作用させ,阻害剤依存性に光架橋したタンパクをSDS-PAGEにて分離後,PS1特異抗体で免疫ブロットしたところ,断片型PS1のみを検出した.家族性Alzheimer病関連PS1変異(ΔE9)では,野生型同様にL-852,505によるラベリングを認めたが,機能喪失型PS1変異(D385A)ではラベリング効果を認めなかった.PS複合体の構成因子であるnicastrin, APH-1, PEN2を共発現した細胞(ANPP)ではPS1断片のラベリング効果の著明な亢進を認め,活性型PS1複合体の形成増加が示唆された.
3.BODIPY-L658,458を用いたPS複合体の免疫組織学的解析
ANPP細胞においてBODIPY-L658,458染色を行うと,その蛍光は細胞表面からearly endosomeに検出した.内在性PS発現細胞ではBODIPY-L658,458の蛍光強度は低かった,しかしながら,L-852,505を界面活性剤非存在下で培養細胞に作用させ,光架橋後,抗biotin抗体で免疫染色を行ったところ細胞表面に蛍光を検出し,内在性レベルでも細胞表面にPSを検出した.

Report

(1 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2005 2004

All Journal Article (3 results)

  • [Journal Article] プレセニリン2005

    • Author(s)
      池内 健
    • Journal Title

      Dementia Japan (印刷中)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] アルツハイマー病:β・γセクレターゼ阻害剤2004

    • Author(s)
      池内 健
    • Journal Title

      BRAIN MEDICAL 16・1

      Pages: 9-15

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] 病気はどこまでゲノムで決められているか:痴呆2004

    • Author(s)
      池内 健
    • Journal Title

      Molecular Medicine 41・増刊号

      Pages: 322-327

    • Related Report
      2004 Annual Research Report

URL: 

Published: 2004-04-01   Modified: 2018-03-28  

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