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標識ポリオウイルス高感度イメージングによる血液脳関門通過機構の解析

Research Project

Project/Area Number 16017224
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

大岡 静衣  東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (80313097)

Project Period (FY) 2004 – 2005
Project Status Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help
¥12,800,000 (Direct Cost: ¥12,800,000)
Fiscal Year 2005: ¥6,400,000 (Direct Cost: ¥6,400,000)
Fiscal Year 2004: ¥6,400,000 (Direct Cost: ¥6,400,000)
Keywordsポリオウイルス / 血液脳関門 / イメージング
Research Abstract

蛍光色素succinimidyl esterによるポリオウイルス(PV)の直接標識に成功した。運動神経初代培養細胞軸索における標識PVの逆行性輸送の共焦点顕微鏡下リアルタイム観察に成功した。この結果は、PVのリアルタイム観察系を確立できたことを示す。
BBB血管内皮細胞のPV透過機構を検討するためのin vitro系の確立に成功した。トランスウェル上にCD155非発現マウス脳血管内皮細胞を培養し、タイトジャンクションを形成させた後、蛍光標識PVまたは蛍光標識transferrin(Tf)を管腔側に添加し、基底膜側から検出される蛍光強度を測定することにより、PVまたはTfの透過性を検討した。その結果、BBBの透過性が高いことが知られているTfと同様に、PVの透過性は圧倒的に高かった。これらの結果から、PVはCD155非依存的にBBBを効率よく透過することを示唆することができた。
PVのBBB透過がエンドソームを介しているのかどうかを明らかにするため、マウス脳血管内皮細胞において、蛍光標識PVと他の蛍光標識マーカー分子との局在を、共焦点顕微鏡によりリアルタイム観察した。PVがTf又はdextranと同一小胞で輸送される様子が観察された。一方、PVはraftのマーカーであるcholera toxin subunit Bとは共局在していなかった。この結果から、PVはCD155非依存的にエンドサイトーシスされてdextran又はTfを含むエンドソームに入るが、raftとは相互作用しないことが示唆された。またマウス脳血管内皮細胞を用いた非標識PVと標識Tfの取り込み競合実験において、PVの存在によりTfの取り込みが低下した。これらの結果から、PVはTfと共通した経路を介してCD155非依存的にエンドサイトーシスされることが示唆された。

Report

(2 results)
  • 2005 Annual Research Report
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (8 results)

All 2005 2004

All Journal Article (6 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Kakugo virus from brains of aggressive worker honeybees.2005

    • Author(s)
      Fujiyuki, T., Takeuchi, H., Ono M., Ohka S., Sasaki T., Nomoto A., Kubo T.
    • Journal Title

      Adv.Virus.Res. 65

      Pages: 1-27

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Blockade of the poliovirus-induced cytopathic effect in neural cells by monoclonal antibody against poliovirus or the human poliovirus receptor.2005

    • Author(s)
      Yanagiya, A., Jia Q., Ohka S., Horie H., Nomoto A.
    • Journal Title

      J.Virol. 79

      Pages: 1523-1532

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Blockade of the poliovirus-induced cytopathic effect in neural cells by monoclonal antibody against poliovirus or the human poliovirus receptor.2005

    • Author(s)
      Yanagiya A., Jia Q., Ohka S., Horie H, Nomoto A.
    • Journal Title

      J.Virol. 79(3)

      Pages: 1523-1532

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Receptor (CD155)-dependent endocytosis of poliovirus and retrograde axonal transport of the endosome.2004

    • Author(s)
      Ohka S., Matsuda N., Tohyama K., Oda T., Morikawa M., Kuge S., Nomoto A.
    • Journal Title

      J.Virol. 78(13)

      Pages: 7186-7198

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Ligand stimulation of CD155alpha inhibits cell adhesion and enhances cell migration in fibroblasts.2004

    • Author(s)
      Oda T., Ohka S., Nomoto A.
    • Journal Title

      Biochem.Biophys.Res.Commun. 319(4)

      Pages: 1253-1264

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Oligo(dA-dT)-dependent signal amplification for the detection of proteins in cells.2004

    • Author(s)
      Hanaki K., Ohka S., Yamanoto K., Nomoto A., Yoshikura H.
    • Journal Title

      Biotechniques 36(5)

      Pages: 862-863

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Book] モデル動物の作製と維持2004

    • Author(s)
      編集委員:森脇和郎, 山村研一, 米川博通(執筆者:大岡静衣他)
    • Total Pages
      978
    • Publisher
      株式会社 エル・アイ・シー
    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 標的抗原の検出方法2004

    • Inventor(s)
      花木 賢一, 他4名
    • Industrial Property Rights Holder
      花木 賢一, 大岡 静衣
    • Filing Date
      2004-06-17
    • Related Report
      2005 Annual Research Report

URL: 

Published: 2004-04-01   Modified: 2018-03-28  

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