標識ポリオウイルス高感度イメージングによる血液脳関門通過機構の解析

• Project/Area Number: 16017224
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 大岡 静衣 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (80313097)
• Project Period (FY): 2004 – 2005
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2005)
• Budget Amount: ¥12,800,000 (Direct Cost: ¥12,800,000); Fiscal Year 2005: ¥6,400,000 (Direct Cost: ¥6,400,000); Fiscal Year 2004: ¥6,400,000 (Direct Cost: ¥6,400,000)
• Keywords: ポリオウイルス / 血液脳関門 / イメージング

Research Abstract

蛍光色素succinimidyl esterによるポリオウイルス(PV)の直接標識に成功した。運動神経初代培養細胞軸索における標識PVの逆行性輸送の共焦点顕微鏡下リアルタイム観察に成功した。この結果は、PVのリアルタイム観察系を確立できたことを示す。
BBB血管内皮細胞のPV透過機構を検討するためのin vitro系の確立に成功した。トランスウェル上にCD155非発現マウス脳血管内皮細胞を培養し、タイトジャンクションを形成させた後、蛍光標識PVまたは蛍光標識transferrin(Tf)を管腔側に添加し、基底膜側から検出される蛍光強度を測定することにより、PVまたはTfの透過性を検討した。その結果、BBBの透過性が高いことが知られているTfと同様に、PVの透過性は圧倒的に高かった。これらの結果から、PVはCD155非依存的にBBBを効率よく透過することを示唆することができた。
PVのBBB透過がエンドソームを介しているのかどうかを明らかにするため、マウス脳血管内皮細胞において、蛍光標識PVと他の蛍光標識マーカー分子との局在を、共焦点顕微鏡によりリアルタイム観察した。PVがTf又はdextranと同一小胞で輸送される様子が観察された。一方、PVはraftのマーカーであるcholera toxin subunit Bとは共局在していなかった。この結果から、PVはCD155非依存的にエンドサイトーシスされてdextran又はTfを含むエンドソームに入るが、raftとは相互作用しないことが示唆された。またマウス脳血管内皮細胞を用いた非標識PVと標識Tfの取り込み競合実験において、PVの存在によりTfの取り込みが低下した。これらの結果から、PVはTfと共通した経路を介してCD155非依存的にエンドサイトーシスされることが示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Kakugo virus from brains of aggressive worker honeybees. (2005)
  • Author(s): Fujiyuki, T., Takeuchi, H., Ono M., Ohka S., Sasaki T., Nomoto A., Kubo T.
  • Journal Title: Adv.Virus.Res. 65 Pages: 1-27
• [Journal Article] Blockade of the poliovirus-induced cytopathic effect in neural cells by monoclonal antibody against poliovirus or the human poliovirus receptor. (2005)
  • Author(s): Yanagiya, A., Jia Q., Ohka S., Horie H., Nomoto A.
  • Journal Title: J.Virol. 79 Pages: 1523-1532
• [Journal Article] Blockade of the poliovirus-induced cytopathic effect in neural cells by monoclonal antibody against poliovirus or the human poliovirus receptor. (2005)
  • Author(s): Yanagiya A., Jia Q., Ohka S., Horie H, Nomoto A.
  • Journal Title: J.Virol. 79(3) Pages: 1523-1532
• [Journal Article] Receptor (CD155)-dependent endocytosis of poliovirus and retrograde axonal transport of the endosome. (2004)
  • Author(s): Ohka S., Matsuda N., Tohyama K., Oda T., Morikawa M., Kuge S., Nomoto A.
  • Journal Title: J.Virol. 78(13) Pages: 7186-7198
• [Journal Article] Ligand stimulation of CD155alpha inhibits cell adhesion and enhances cell migration in fibroblasts. (2004)
  • Author(s): Oda T., Ohka S., Nomoto A.
  • Journal Title: Biochem.Biophys.Res.Commun. 319(4) Pages: 1253-1264
• [Journal Article] Oligo(dA-dT)-dependent signal amplification for the detection of proteins in cells. (2004)
  • Author(s): Hanaki K., Ohka S., Yamanoto K., Nomoto A., Yoshikura H.
  • Journal Title: Biotechniques 36(5) Pages: 862-863
• [Book] モデル動物の作製と維持 (2004)
  • Author(s): 編集委員:森脇和郎, 山村研一, 米川博通(執筆者:大岡静衣他)
  • Total Pages: 978
  • Publisher: 株式会社 エル・アイ・シー
• [Patent(Industrial Property Rights)] 標的抗原の検出方法 (2004)
  • Inventor(s): 花木 賢一, 他4名
  • Industrial Property Rights Holder: 花木 賢一, 大岡 静衣
  • Filing Date: 2004-06-17