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染色体安定性維持に機能するヒストンアセチル化酵素Tip60複合体の生化学的解析

Research Project

Project/Area Number 16021204
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

多田 周右  東北大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (00216970)

Project Period (FY) 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥5,000,000 (Direct Cost: ¥5,000,000)
Fiscal Year 2004: ¥5,000,000 (Direct Cost: ¥5,000,000)
KeywordsTip60複合体 / Tad54α / Xenopus卵抽出液無細胞実験系 / Tap54α-K76R / DNA複製 / DNA複製ライセンス化反応 / MCM複合体 / クロマチン
Research Abstract

Tip60ヒストンアセチル化酵素複合体のゲノム安定性維持機構への寄与について解明するにあたり、DNA代謝との関連について機能的に理解しやすいと考えられた複合体構成タンパク質、Tap54αに照準を絞り、Xenopus卵抽出液無細胞実験系を用いて検討をおこなった。Tap54αの機能を欠損させるために、Walker Aモチーフ中のリジン残基をアルギニン残基に変えた組み換えタンパク質(Tap54α-K76R、以下K76Rと記す)を大腸菌において発現させ精製した。このK76Rを卵抽出液に添加し、再現されるDNA複製などの過程に及ぼす影響について検討をおこなった。その結果、DNA複製活性の顕著な低下が観察された。さらに詳細に解析するために、ウエスタンブロット法を用いてDNA複製に関与する種々のタンパク質のクロマチンへの結合について時間を追って観察した。その結果、K76Rの添加によりDNA複製ライセンス化反応に必須なタンパク質複合体であるMCM複合体のクロマチンへの結合量が顕著に減少していた。この時、DNA複製ライセンス化反応に関与するMCM複合体以外のタンパク質、Orc1、Cdc6、Cdt1のクロマチンへの結合については顕著な影響は見られなかった。すなわち、Tap54αがMCM複合体のクロマチンへの結合において重要な役割を果たしている可能性が示唆された。次にK76R添加によるDNA複製への影響についてDNA複製ライセンス化反応以後に的を絞って観察した。その結果、DNA複製活性が通常時の50%程度に減少することが分かった。すなわち、Tap54αがDNA複製開始反応あるいは伸長反応などのDNA複製過程においても何らかの役割を果たしている可能性が示唆された。一方、野生型Tap54αを用いて同様の実験をおこなったところ、タンパク質の添加による影響は観察されなかった。

Report

(1 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All 2005 2004

All Journal Article (4 results)

  • [Journal Article] Licensing for DNA replication requires a strict sequential assembly of Cdc6 and Cdt1 onto chromatin in Xenopus egg extracts.2005

    • Author(s)
      Tsuyama T
    • Journal Title

      Nucleic Acids Research 33

      Pages: 765-775

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Structural basis for inhibition of the replication licensing factor Cdt1 by geminin.2004

    • Author(s)
      Lee C
    • Journal Title

      Nature 430

      Pages: 913-917

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] The absence of a functional relationship between ATM and BLM, the components of BASC, in DT40 cells.2004

    • Author(s)
      Wang W
    • Journal Title

      Biochimica et Biophysica Acta 1688

      Pages: 137-144

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Bloom症候群原因遺伝子産物の機能2004

    • Author(s)
      多田周右
    • Journal Title

      医学のあゆみ 208

      Pages: 863-869

    • Related Report
      2004 Annual Research Report

URL: 

Published: 2004-04-01   Modified: 2018-03-28  

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