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ヒトプレB細胞よりBLM破壊株の作製とその非相同組換え能の解析

Research Project

Project/Area Number 16021247
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionYokohama City University

Principal Investigator

小山 秀機  横浜市立大学, 木原生物学研究所, 教授 (40085626)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 足立 典隆  横浜市立大学, 木原生物学研究所, 助手 (30264675)
Project Period (FY) 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥5,100,000 (Direct Cost: ¥5,100,000)
Fiscal Year 2004: ¥5,100,000 (Direct Cost: ¥5,100,000)
Keywordsブルーム症候群 / がん / 非相同的末端連結 / ヒト細胞 / ジーンターゲティング / BLM / DNAリガーゼIV / KU70
Research Abstract

高発がん性遺伝病ブルーム症候群は、高頻度の姉妹染色体交換とともに欠失、転座などの染色体異常を示す。この異常の原因となり発がんにつながる可能性のあるエラープローンの非相同的末端連結(NHEJ)の解析は、わずかである。我々はヒトプレB細胞腫由来Nalm-6株およびNHEJに必須のDNAリガーゼIV(Lig4)欠損株から、ジーンターゲティングによりBLM破壊株と2重破壊株を取得し、性状解析を行った。また、4株のHPRT座へSceI部位を導入した株を作製し、ついでSceI発現ベクターを導入・誘発した2重鎖切断(DSB)のNHEJによる修復能を解析した。その結果、BLM破壊株は野生株に比べて増殖遅延や1本鎖切断を生じるMMSやUVに対する高感受性、突然変異率の上昇などの表現型を示したが、興味深いことに、これら表現型はLig4欠損との2重破壊株では抑制された。これはBLM破壊株において、DNA複製の際に1本鎖切断からone-ended DSBを多数生じ、NHEJ修復による異常な組換えにより細胞死を起こすためと考える。一方、染色体SceI部位に誘導したtwo-ended DSBのNHEJ修復において、BLM破壊株は野生株とほぼ同じ修復パターンを示した。この結果から、ブルーム細胞においてone-ended DSBのNHEJ修復が、染色体異常を引き起こす原因であることが示唆される。一方、NHEJの主要因子KU70の破壊株作製のため、野生株をターゲティングしてヘテロ破壊株を得たがホモ破壊株が得られず、KU70は増殖・生存に必須と考える。そこでTet制御系を用いた条件致死株の作製を試み、ヘテロ破壊株にTet制御ベクターを導入した。ついでTet応答性ヒトKU70 cDNAベクターを導入し、DOXで制御できる株を分離した。この株を用いてKU70遺伝子のターゲティングを行った。

Report

(1 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (6 results)

All 2005 2004 Other

All Journal Article (6 results)

  • [Journal Article] Genetic interaction between DNA polymerase b and DNA-PKcs in neurogenesis and embryogenesis.2005

    • Author(s)
      Niimi, N.
    • Journal Title

      Cell Death Diff. 12

      Pages: 184-191

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Genetic interactions between BLM and the nonhomologous end-joining pathway in human cells.2004

    • Author(s)
      So, S.
    • Journal Title

      J.Biol. Chem. 279

      Pages: 55433-55442

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] p53 deficiency rescues apoptosis but not differentiation in DNA polymerase beta-deficient mice.2004

    • Author(s)
      Sugo, N.
    • Journal Title

      Mol.Cell.Biol. 24

      Pages: 9470-9477

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Loss of nonhomologous end-joining confers camptothecin resistance in DT40 cells : Implications for the repair of topoisomerase I-mediated DNA damage.2004

    • Author(s)
      Adachi, N.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. 279

      Pages: 37343-37348

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Genetic evidence for involvement of two distinct nonhomologous end-joining pathways in repair of topoisomerase II-mediated DNA damage.2004

    • Author(s)
      Adachi, N.
    • Journal Title

      Biochem.Biophys.Res.Commun. 318

      Pages: 856-861

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Evidence for a role of vertebrate Rad52 in the repair of topoisomerase II-mediated DNA damage.

    • Author(s)
      Adachi, N.
    • Journal Title

      DNA Cell Biol. (in press)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report

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Published: 2004-04-01   Modified: 2018-03-28  

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