血管新生誘導因子HIF2を介した乳がん癌遺伝子Int6の機序解明

• Project/Area Number: 16022265
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• Principal Investigator: 芝崎 太 財団法人東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 副参事研究員 (90300954)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 加藤 裕之 財団法人東京都医学研究機構, 研究員 (30301732)
• Project Period (FY): 2004
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2004)
• Budget Amount: ¥4,600,000 (Direct Cost: ¥4,600,000); Fiscal Year 2004: ¥4,600,000 (Direct Cost: ¥4,600,000)
• Keywords: 低酸素 / 血管新生 / 乳がん / がん抑制遺伝子 / マウス乳がんウイルス / RNAi / 遺伝子改変マウス / VEGF

Research Abstract

これまでに、私達はHIFの結合因子を酵母Two hybrid法を用いて解析し、HIF2の結合因子として、マウス乳癌ウイルス(MMTV)による標的癌抑制遺伝子であるInt6を同定した。MMTVのintegrationにより、C-端が欠損した、いわゆるdominant negative formであるInt6ΔCが発現し、マウスの乳癌を発症すると報告されている。
詳細な解析の結果、(1)dominant negativeであるInt6ΔCはnormoxiaのみならずHypoxiaでもHIF2αのVEGFの活性を1.5倍から2倍近く上昇させた。また、luciferaseの活性測定からもこの活性上昇は、HIF2α特異的であり、HIF1およびHIF3とは無関係であること。そして、Int6wtの発現はHIF2α活性を下げたが、この理由としてInt6 wtの発現により細胞死が誘導されたためで、ここでみられるHIF familyのVEGF活性低下は、主としてこの細胞死によると考えられた。以上の結果から、Int6はHIF2αに直接結合する調節因子であり、負に調節する因子であることが判明した。(2)これはInt6のsiRNAを用いた実験結果よりも明らかとなり、マウス皮下へのベクター型RNAiの導入により著明な血管新生が起こることが確認された。(3)また、C末端の欠損変異体およびベクター型RNAiを用いた遺伝子導入マウスの作製では、初期に現れる表現型が脊椎の湾曲など軟骨・骨形成不全が認められ、Int6の成長発達への役割が示唆された。(4)人の乳がん組織を用いた内因性Int6のmRNA測定では、ほとんどの乳がんでInt6の低下が著明に認められ、悪性度とInt6発現の相関が予想され、さらに多くの症例で検討する必要がある。
最近、マウスにしか発見されなかったMMTVが実は人への感染例が見つかり、乳がんの一部でMMTVが重要な役割を果たしている可能性が出てきた。これらの事実からも、今後Int6の解析は重要になるだけでなく、診断や治療法の開発に大きな貢献をもたらすものと確信する。

Research Products

• [Journal Article] Potent neuroprotection of CsA by inhibiting pathways involving calcinenurn and cyclophilin D in forebrain ischemia. (2005)
  • Author(s): Shibasaki, F., Uchino, H., Kristian, T., Perkins, G., Ishii, N., Siesio, B.K.
  • Journal Title: Pharmacology of Cerebral Ischemia(Medpharm Scientific Publisher Stuttgart) Pages: 453-465
• [Journal Article] Bcl-2 phosphorylation precedes caspases-3 activation and cell death after neonatal cerebral hypoxia-ischemic injury (2005)
  • Author(s): Hallin, U., Kondo, E., Shibasaki, F., Blomgren, K.
  • Journal Title: Neuroscience (in press)
• [Journal Article] Calcium Signal-induced Coffilin Dephosphorylation is Mediated by Slingshot via Calcineurin. (2005)
  • Author(s): Wang, Y., Shibasaki, F., Niwa, R., Uemura, T., Mizuno, K.
  • Journal Title: J.Biol.Chem. (in press)
• [Journal Article] Gα12/13-mediated production of reactive oxygen speicies is critical for angiotensin II receptor-induced NFAT activation in cardiac fibroblasts. (2005)
  • Author(s): Fujii, T., Onohara, N., Fukutomi, M., Nagamatsu, Y., Naruyama, Y., Kobayashi, H., Inoue, R., Sugimoto, H., Shibasaki, F., Nagao, T., Nishida, M., Kurose, H
  • Journal Title: J.Biol.Chem. (in press)
• [Journal Article] T細胞アレルギーによる免疫制御 (2005)
  • Author(s): 芝崎 太
  • Journal Title: 日本臨床 (In press)
• [Journal Article] 脳蘇生における薬物療法 (2005)
  • Author(s): 内野博之, 芝崎 太, 石井脩夫
  • Journal Title: 蘇生 (In press)
• [Journal Article] Calcineurin inhibits Na^+/Ca^<2+> exchange in phenylephrine-treated hypertrophic cardiomyocytes. (2004)
  • Author(s): Yuki Katanosaki, Yuko Iwata, Yuko Kobayashi, Futoshi Shibasaki, Shigeo Wakabayashi, Munekazu Shigekawa
  • Journal Title: J.Biol.Chem. 280 Pages: 5764-5772
• [Journal Article] Histon deacetylase 7 associates with hypoxia- inducible factor 1 alpha and regulate transcriptional activity. (2004)
  • Author(s): Kato H, Tamamizu-Kato S, Shibasaki F
  • Journal Title: J.Biol.Chem. 274 Pages: 41966-41974
• [Journal Article] Activation of the CKI-CDK-Rb-E2F pathway in full genome hepatitis C virus-expressing cells. (2004)
  • Author(s): Tsukiyama-Kohara K, Tone S, Maruyama I, Inoue K, Katsume A, Nuriya H, Ohmori H, Ohkawa J, Taira K, Hoshikawa Y, Shibasaki F, et al.
  • Journal Title: J.Biol.Chem. 279 Pages: 14531-14541
• [Journal Article] Calcineurin and cyclophilin D are differential targets of neuroprotection by immunosuppressants CsA and FK506 in ischemic brain damage. (2004)
  • Author(s): Uchino H, Ishii N, Shibasaki F
  • Journal Title: Acta Neurochir Suppl. 86 Pages: 105-111
• [Journal Article] 日本のTRCの現状と展望 (2004)
  • Author(s): 芝崎 太
  • Journal Title: Medichem News 14 Pages: 7-11
• [Journal Article] eTagによる癌治療効果予測 (2004)
  • Author(s): Sharat Singh, 戸井雅和, 芝崎 太
  • Journal Title: 細胞 36 Pages: 31-35
• [Journal Article] 新規同時他項目アッセイシステムeTagの応用 (2004)
  • Author(s): 芝崎 太
  • Journal Title: バイオベンチャー 18 Pages: 38-40
• [Journal Article] 虚血性神経細胞死の分子機序と薬物療法による脳保護の可能性 (2004)
  • Author(s): 内野博之, 芝崎 太, 石井脩夫
  • Journal Title: Life support and Anesthesia 11 Pages: 1-18
• [Journal Article] 虚血による神経細胞死とカルシニューリン、シクロフィリン (2004)
  • Author(s): 内野博之, 芝崎 太, 石井脩夫
  • Journal Title: Biotherapy 18 Pages: 115-127
• [Journal Article] ミトコンドリア膜透過性に対するシクロポリンの作用 (2004)
  • Author(s): 芝崎 太, 内野博之
  • Journal Title: 医薬ジャーナル 40 Pages: 172-177
• [Journal Article] ミトコンドリア膜透過性に対するシクロポリンの作用。特集:シクロスポリンの作用〜解明された多様性〜 (2004)
  • Author(s): 芝崎 太, 内野博之
  • Journal Title: 医薬ジャーナル特集号 Pages: 30-35
• [Journal Article] 特集「病態とアポトーシス」虚血による神経細胞死とカルシウム・カルシニューリン (2004)
  • Author(s): 芝崎 太, 内野博之
  • Journal Title: Biotherapy 18 Pages: 23-26
• [Journal Article] 「脳を守るための戦略」虚血性神経細胞死の分子機序と薬物療法による脳保護の可能性 (2004)
  • Author(s): 内野博之, 芝崎 太, 石井脩夫
  • Journal Title: Lisa 11 Pages: 114-117