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シアストレス作動性新規低分子量G蛋白による血管内皮バリア機能強化作用機構の解明

Research Project

Project/Area Number 16590685
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Section一般
Research Field Circulatory organs internal medicine
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

酒井 尚彦  阪大, 医学(系)研究科(研究院), 助手 (80294073)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 石神 眞人  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (10379266)
Project Period (FY) 2004 – 2005
Project Status Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help
¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
KeywordsShear Stress / 血管内皮細胞 / Rho family / barrier機能 / Actin細胞骨格 / 細胞間接着装置
Research Abstract

私共は、ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVECs)におけるShear Stress応答遺伝子群の中で、Rhoに相同性を持つ新規遺伝子RECS28に着目して、まず全長cloningとGTPγS結合実験からRECS28はG蛋白質であると証明した。さらに変異導入によりdominant active(DA)、negative(DN)を作成、GFP蛍光標識したplasmidsを構築した。また抗ヒトRECS28特異的ポリクローナル抗体を作製し、RECS28野生型を一過性発現させたコントロール細胞で、抗体がRECS28を認識できることを確認した。
(1)血管内皮barrier機能:DA、DNを一過性発現させたHUVECsをFACSで回収、単層培養した。DextranをFITC標識してHUVECsを通過させ、通過量を定量し、内皮barrier機能の検定とした。この際、生理的透過性亢進因子であるVEGFやTPA刺激下でのDextran通過量も定量した。その結果、DNはbarrier機能を低下、DAはbarrier機能を増強させた。
(2)Actin細胞骨格:actin stress fiber(ASF)形成の検討の結果、HUVECsでは、DNはASF形成促進、DAはASF形成を抑制した。
(3)細胞間接着の関連:細胞間接着構成因子occludin(Tight Junction)とVE-cadherin(Adherens Junction)の免疫組織化学染色により、細胞間接着装置の形態をDNは破壊し、DAは保持する、ことを確認した。
以上から、RECS28は細胞骨格再編成を通して細胞間接着装置と連動し、血管内皮barrier透過機構を制御し抗動脈硬化に作用することが示唆された。これらの成果について現在論文投稿中である。

Report

(1 results)
  • 2004 Annual Research Report

URL: 

Published: 2004-04-01   Modified: 2016-04-21  

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