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ES細胞を用いたsiRNAによる新しいノックダウンマウス作製法の開発

Research Project

Project/Area Number 16650091
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Laboratory animal science
Research InstitutionTokyo Medical and Dental University

Principal Investigator

横田 隆徳  東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (90231688)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 三谷 匡  近畿大学, 先端技術総合研究所, 講師 (10322265)
Project Period (FY) 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
Fiscal Year 2004: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
KeywordsRNAi / トランスジェニックマウス / SOD1 / shRNA / ES細胞 / キメラマウス
Research Abstract

ES細胞に未発現のターゲット遺伝子のへshRNAの導入の第1段階としてハイグロマイシン耐性フィーダーを用いて、ターゲットの直鎖状化したHAタグ遺伝子を融合させた未発現遺伝子であるG93ASOD1変異遺伝子を発現ベクターに組み込み、これをエレクトロポレーションした。ハイグロマイシンで耐性ES細胞を選択して、50個の耐性ES細胞クローンの中からHAタグでウエスタンブロットを行いターゲット遺伝子を安定を発現したES細胞クローンが得られた。
第2段階として未発現遺伝子が安定発現したES細胞ラインに対して、直鎖状化したShort-hairpinタイプのsiRNA発現ベクターをエレクトロポレーションしてネオマイシンでshRNAを安定発現ES細胞をクローン化した。HAタグタグでウエスタンブロットを行いターゲットG93ASOD1遺伝子発現が抑制されているG93ASOD1変異遺伝子とshRNAの両者が安定発現し、第1段階で発現させたG93ASOD1を有効に抑制しているES細胞クローンが作製できた。
現在このダブル遺伝子安定発現ES細胞クローンをブラストシストにマイクロインジェクションしてキメラマウスを複数のクローンで作製したが、ESの寄与率が悪く、トラブルシュートとして第1段階のES細胞クローンでキメラマウスを作製中である。

Report

(1 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (6 results)

All 2004

All Journal Article (6 results)

  • [Journal Article] Down regulation of DJ-1 enhances cell death by oxidative stress, ER stress, and proteasome inhibition.2004

    • Author(s)
      Yokota T, et al.
    • Journal Title

      Biochem Biophys Res Com 314

      Pages: 283-291

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Sequence-dependent and independent inhibition of mutant ataxin 3 by short interfering RNA.2004

    • Author(s)
      Li Y, Yokota T, et al.
    • Journal Title

      Annals of Neurology 56

      Pages: 124-129

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] IRF-1 and IRF-2 distinctively up-regulate gene expression and production of IL-7 in human intestinal epithelial cells.2004

    • Author(s)
      Ohshima S, Yokota T, et al.
    • Journal Title

      Mol Cell Biol 24

      Pages: 6298-6310

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] siRNAを用いたC型肝炎の遺伝子治療2004

    • Author(s)
      横田隆徳, 水澤英洋
    • Journal Title

      Molecular Medicine 41

      Pages: 36-43

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] RNAiを用いたウイルス性肝炎の遺伝子治療2004

    • Author(s)
      横田隆徳
    • Journal Title

      医学のあゆみ 208

      Pages: 669-676

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] 神経変性疾患へのRNAiの臨床応用の展望2004

    • Author(s)
      横田隆徳
    • Journal Title

      最新医学 21

      Pages: 138-144

    • NAID

      40006151866

    • Related Report
      2004 Annual Research Report

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Published: 2004-04-01   Modified: 2016-04-21  

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