新しい発想にもとづくRNA血液診断システムの構築

• Project/Area Number: 16651101
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Applied genomics
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 野島 博 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (30156195)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 薮田 紀一 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (10343245) ; 奥崎 大介 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (00346131) ; 東岸 任弘 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (20379093)
• Project Period (FY): 2004 – 2006
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2006)
• Budget Amount: ¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000); Fiscal Year 2006: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2005: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2004: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
• Keywords: 自己免疫疾患 / 段階的サブトラクション法 / 血液細胞 / DNAチップ / アンフィレギュリン / リアルタイムPCR / 慢性関節リウマチ / 遺伝子診断 / 段階的サブトランクション法 / 動脈炎 / 遺伝子マーカー

Research Abstract

自己免疫疾患患者の血液細胞あるいは骨髄液細胞で特異的に過剰発現している遺伝子群を、独自に開発した段階的サブトラクション法(多段差引法)を主とし、DNAチップ解析(Agilent, Hu44K)を補完的に用いて、包括的に単離・同定することにより、自己免疫疾患の発症に深く関わっている遺伝子を見出して解析することを目的として研究を進めてきた。最終的な判定は、患者血液から抽出したRNAを混合し、それをcDNA化したサンプルをテンプレートとしたRT-PCR法によって行い、このうち、発現レベルの再現性チェックに合格したものだけを採用した。対象とした自己免疫疾患は慢性関節リウマチ(RA)、全身性エリテマトーデス(SLE)、自己免疫性血小板減少性紫斑病(ITP)、顕微鏡的多発血管炎(MPA)、高安動脈炎(TA)、ウエゲナー肉芽腫症(WG)、抗リン脂質抗体症候群(APS)、アレルギー性肉芽腫血管炎(AGA)、悪性関節リウマチ(MRA)、側頭動脈炎(GCA)、バージャー病(BD)、結節性多発動脈炎(PN)である。単離した遺伝子については転写レベルを個々の患者で調べることによって病態との関連付けを行った。そのうちアンフィレギュリン遺伝子はSLE, ITP, RAという3つの自己免疫疾患において多くの患者で数十倍の過剰発現が認められた。RAの骨髄液細胞では各患者においてさらに数倍以上の過剰発現が見出された。そこでRAをモデルとして分子細胞生物学的な手法を用いて詳細に解析したところ、アンフィレギュリンがRA患者の滑膜細胞においてEGF受容体シグナル伝達経路の活性化を誘導することで、滑膜細胞の増殖の亢進を誘起していることを見出した。

Research Products

• [Journal Article] Isolation and expression profiling of genes upregulated in bone marrow-derived mononuclear cells of rheumatoid arthritis patients. (2006)
  • Author(s): Nakamura N, Shimaoka Y, Tougan T, Onda H, Okuzaki D, Zhao H, Fujimori A, Yabuta N, Nagamori I, Tanigawa A, Sato J, Oda T, Hayashida K, Suzuki R, Yukioka M, Nojima H, Ochi T
  • Journal Title: DNA Res. 13(4) Pages: 169-183
• [Journal Article] Isolation and expression profiling of genes upregulated in the peripheral blood cells of systemic lupus erythematosus patients. (2006)
  • Author(s): Ishii, T., Onda, H., Tanigawa, A., Ohshima, S., Fujiwara, H., Mima, T., Katada, Y., Hitoshi Deguchi, H., Suemura, M., Miyake, T., Miyatake, K., Kawase, I, Zhao, H., Tomiyama, Y., Saeki, Y., Noiima, H.
  • Journal Title: DNA Res. 112(1) Pages: 1-11
• [Journal Article] Progesterone regulated cell-specific expression of G-type cyclins becomes aberrant in the periimplantation mouse uterus missing Hoxa-10. (2005)
  • Author(s): Yue, L., Daikoku, T., Hou, X., Li, M., Wang, H., Nojima, H., Dey, A.K., Das, S.K
  • Journal Title: Endocrinology 146(5) Pages: 2424-2433
• [Journal Article] A B56 regulatory subunit of protein phosphatase 2A localizes to nuclear specles in cardiac myocytes. (2005)
  • Author(s): Gigena, M.S., Ito, A., Noiima, H., Rogers, T.
  • Journal Title: Am.J.Physiol. 289(1)
• [Journal Article] Mcp6, a meiois-specific coiled-coil protein of Schizosaccharomyces pombe, localizes at the spindle pole body and is required for horsetail movement. (2005)
  • Author(s): Saito, T.T., Tougan, T., Okuzaki, D., Kasama, T., Nojima, H.
  • Journal Title: J.Cell Sci. 118(2) Pages: 447-459
• [Journal Article] The centrosome protein Lats2 is a phosphorylation target of Aurora-A kinase. (2004)
  • Author(s): Toji, S., Yabuta, N., Kobayashi, T., Tamai, K., Nojima, H.
  • Journal Title: Genes to Cells 9(4) Pages: 383-397
• [Journal Article] A derivative of oleamide potently inhibits the spontaneous metastasis of mouse melanoma BL6 cells. (2004)
  • Author(s): Ito, A., Morita, N., Miura, D., Koma, Y.I., Kataoka T.R., Yamasaki, H., Kitamura
  • Journal Title: Carcinogenesis 25(10) Pages: 2015-2022
• [Journal Article] Mcp7, a meiosis-specific coiled-coil protein of fission yeast, associates with Meu13 and is required for meiotic recombination. (2004)
  • Author(s): Saito, T.T., Tougan, T., Kasama, T., Okuzaki, D., Nojima, H.
  • Journal Title: Nuc.Acids Res. 32(11) Pages: 3325-3339
• [Patent(Industrial Property Rights)] 慢性関節リウマチに罹患したヒト由来の骨髄又は末梢血細胞で特異的に発現亢進している遺伝子群 (2006)
  • Inventor(s): 野島博, 越智隆弘
  • Industrial Property Rights Holder: 大阪大学知財部
  • Industrial Property Number: 2006-274629
  • Filing Date: 2006-10-06
• [Patent(Industrial Property Rights)] 自己免疫性血小板減少性紫斑病(ITP)患者の血液細胞特異的遺伝子群 (2005)
  • Inventor(s): 野島 博, 恩田 弘明, 冨山 佳昭
  • Industrial Property Rights Holder: 科学技術振興機構, 大阪大学知財部
  • Industrial Property Number: 2005-306409
  • Filing Date: 2005-09-30
• [Patent(Industrial Property Rights)] 正常ヒト肝臓細胞特異的遺伝子群 (2005)
  • Inventor(s): 野島 博, 恩田 弘明, 門田 守人, 左近 賢人
  • Industrial Property Rights Holder: 科学技術振興機構, 大阪大学知財部
  • Industrial Property Number: 2005-192707
  • Filing Date: 2005-06-30
• [Patent(Industrial Property Rights)] 血管炎(anglitis)患者の血液細胞特異的遺伝子群 (2005)
  • Inventor(s): 野島 博, 恩田 弘明, 橋本 博史, 小林 茂人
  • Industrial Property Rights Holder: 科学技術振興機構, 大阪大学知財部
  • Industrial Property Number: 2005-161681
  • Filing Date: 2005-06-01
• [Patent(Industrial Property Rights)] 全身性エリテマトーテス患者血液細胞で発現亢進している遺伝子群、およびその利用 (2004)
  • Inventor(s): 野島 博, 恩田 弘明, 佐伯 行彦, 大島 至郎
  • Industrial Property Rights Holder: 科学技術振興機構, 大阪大学知財部
  • Industrial Property Number: 2004-289398
  • Filing Date: 2004-09-10
• [Patent(Industrial Property Rights)] 末梢血液細胞に示差的に発現されている遺伝子群、およびそれを用いた診断方法とアッセイ方法 (2003)
  • Inventor(s): 野島 博
  • Industrial Property Rights Holder: 野島 博, (株)ジーンデザイン, 科学技術振興機構
  • Industrial Property Number: 2003-319066
  • Filing Date: 2003