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ARFおよびARLの活性化定量法および細胞内局在決定法の開発

Research Project

Project/Area Number 16657059
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Cell biology
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

中山 和久  京都大学, 薬学研究科, 教授 (40192679)

Project Period (FY) 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
Fiscal Year 2004: ¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
KeywordsGGA / ARF / X線結晶構造解析 / 小胞輸送 / ARF-GEF / アダプター / GATドメイン / BIG2
Research Abstract

低分子量GTP結合蛋白質ARFは、オルガネラ間の蛋白質輸送を行う輸送小胞の形成を調節する。哺乳動物には6種類のアイソフォーム(ARF1-ARF6)が存在する。細胞質に不活性なGDP結合型で存在するARFは、グアニンヌクレオチド交換因子(ARF-GEF)により活性を有するGTP型になるとオルガネラ膜に結合する。その部位にCOPIやAP-1などのコート蛋白質複合体が結合して輸送小胞の形成が始まる。次に、形成された輸送小胞上のGTP型ARFにGTPase活性化蛋白質(ARF-GAP)が作用してGTPがGDPへと加水分解され、ARFとともにコート蛋白質が小胞膜から遊離する。この裸の輸送小胞が標的オルガネラ膜に融合し、蛋白質輸送が完了する。つまり、細胞内小胞輸送はARF-GEFによるARFのGTP型への変換とARF-GAPによるGDP型への変換により調節されている。最近、ARFと結合して小胞輸送を調節する蛋白質GGAを同定し、GGA分子の中央にあるGATドメインがGTP結合型ARFとの特異的な結合に関与することを示した。
そこで本研究では、この相互作用を利用して以下のことを明らかにした。
1.GSTと融合させたGATドメインを用いて、細胞内の活性型ARFを定量するプル・ダウンアッセイ系を確立した。
2.ARF-GEFの一種であるBIG2を細胞内で発現させた時に、どのARFのアイソフォームを活性化するのかをこのアッセイ系を用いて調べたところ、ARF1とARF3を活性化し、ARF5やARF6を活性化しないことを証明した。

Report

(1 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All 2004

All Journal Article (4 results)

  • [Journal Article] Tollip and Tom1 form a complex and recruit ubiquitin-conjugated proteins onto early endosomes.2004

    • Author(s)
      Katoh, Y., et al.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. 279

      Pages: 24435-24443

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Stabilin-1 localises to endosomes and the trans-Golgi network in human macrophages and interacts with GGA adaptors.2004

    • Author(s)
      Kzhyshkowska, J., et al.
    • Journal Title

      J.Leukocyte Biol. 76

      Pages: 1151-1161

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] BIG2,a guanine nucleotide exchange factor for ADP-ribosylation factors : its localization to recycling endosomes and implication in the endosome integrity.2004

    • Author(s)
      Shin, H.-W., et al.
    • Journal Title

      Mol.Biol.Cell 15

      Pages: 5283-5294

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Guanine nucleotide exchange factors for Arf GTPases : their diverse functions in membrane traffic.2004

    • Author(s)
      Shin, H.-W., Nakayama, K.
    • Journal Title

      J.Biochem. 136

      Pages: 761-767

    • NAID

      10016204135

    • Related Report
      2004 Annual Research Report

URL: 

Published: 2004-04-01   Modified: 2016-04-21  

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