ウシ肝cDNAマイクロアレイの評価と妊娠ウシ肝の特異発現遺伝子の検索

• Project/Area Number: 16658105
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Applied animal science
• Research Institution: Iwate University
• Principal Investigator: 橋爪 一善 岩手大学, 農学部, 教授 (10355737)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 木崎 景一郎 岩手大学, 農学部, 助教授 (40337994) ; 高坂 哲也 静岡大学, 農学部, 教授 (10186611) ; 森松 正美 北海道大学, 大学院・医学研究科, 助手 (70241370)
• Project Period (FY): 2004 – 2005
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2005)
• Budget Amount: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000); Fiscal Year 2005: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000); Fiscal Year 2004: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
• Keywords: マイクロアレイ / 肝臓 / ウシ / in situ hybridization / オリゴアレイ / 遺伝子 / 子宮・胎盤

Research Abstract

ウシ肝臓由来cDNAクローンを基に作製したウシ肝cDNAマイクロアレイの有効性を未知クローンの配列、機能、発現動態の解析、検証することから、ウシ肝の生理状態の把握および疾病診断に適用できる汎用的なアレイの開発を目的として、より広範な遺伝子情報を集積した約10,000オリゴ情報からなるアレイを作製した。
発現遺伝子動態の解析には体細胞クローンウシと通常の方法で作出したウシ肝臓を用いた。体細胞クローンウシでは病理および組織学的に変異を示す肝臓が認められるが、著しい病理変異を示さない肝臓であっても数%の遺伝子の発現変動を認め、cDNAアレイに含む数多くの遺伝子情報は、現在のところ機能が十分明確でなくとも肝臓の機能診断に有効な情報であることが示唆された。また、機能および遺伝子の全配列が不明であったcDNAクローンからその発現動態およびin silico解析により、2種の新規遺伝子であるプロラクチン関連タンパク質(PRP)遺伝子を同定し、PRP-VIIIおよび-IXと命名するとともに、in situ hybridizationにより主たる発現細胞が胎盤の二核細胞であることを証明した。加えて、これまで開発してきたウシ肝cDNAマイクロアレイおよび子宮・胎盤cDNAマイクロアレイ上の共通する遺伝子の検証およびin silico解析することから、約10,000オリゴを配置したウシオリゴアレイを作製した。このオリゴアレイは約2,620個の肝由来クローン情報および約1,730個の子宮・胎盤由来クローンを軸として、Gene Bank Database情報を基に抽出した約5,600遺伝子の60塩基配列からなる個別遺伝子情報を集積したものである。尚、本アレイの作製は、これまでアレイ開発で連携してきた農業生物資源研究所のグループとの共同成果である。

Research Products

• [Journal Article] Cloning of the bovine antiapoptotic regulator, BCL2-related protein A1, and its expression in trophoblastic binucleate cells of bovine placenta. (2006)
  • Author(s): Ushizawa K, Takahashi T, Kaneyama K, Hosoe M, Hashizume K.
  • Journal Title: Biol Reprod. 74 Pages: 244-251
• [Journal Article] Biology of the prolactin family in bovine placenta. II. Bovine prolactin-related proteins : Their expression, structure and proposed roles. (2006)
  • Author(s): Ushizawa K, Hashizume K
  • Journal Title: Animal Science J. 77 Pages: 18-27
  • NAID: 10019590802
• [Journal Article] Developmental aberration of liver gene expression in bovine fetuses derived from somatic cell nuclear transplantation. (2006)
  • Author(s): Hearth CB, Ishiwata H, Shiojima S, Kadowaki T, Katsuma S, Ushizawa K, Imai K, Takahashi T, Hirasawa A, Takahashi S, Izaike Y, Tsujimoto G, Hashizume K
  • Journal Title: Clon.Stem Cells 8(In press)
• [Journal Article] Gene expression profiles of bovine trophoblastic cell line (BT-1) analyzed by a custom cDNA microarray. (2005)
  • Author(s): Ushizawa K, Takahashi T, Kaneyama K, Tokunaga T, Tsunoda Y, Hashizume K.
  • Journal Title: J Reprod Dev. 51・2 Pages: 211-220
  • NAID: 130000054344
• [Journal Article] Cloning and expression of two new prolactin-related proteins, prolactin-related protein-VIII and -IX, in bovine placenta. (2005)
  • Author(s): Ushizawa K, Takahashi T, Hosoe M, Kaneyama K, Hashizume K.
  • Journal Title: Reprod Biol Endocrinol. 3
• [Journal Article] Gene Expression Profiles of Bovine Trophoblastic Cell Line (BT-1) Analyzed by a Custom cDNA Microarray (2005)
  • Author(s): K.Ushizawa, T.Tkahashi, K.Kaneyama, T.Tokunaga, Y.Tsunoda, K.Hashizume
  • Journal Title: J Reproduction Development 51(未定)
  • NAID: 130000054344
• [Book] Bovine trophoblast cell culture systems. In Method in Molecular Medicine, Vol.121 Placenta and Trophoblast : Methods and protocols, Vol.1 (2006)
  • Author(s): Hashizume K, Shimada A, Nakano H, Takahashi T.
  • Total Pages: 470
  • Publisher: Bovine trophoblast cell culture systems : a technique to culture bovine trophoblast cells without feeder cells.