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霊長類ES細胞からの無フィーダー、無血清培養における血液細胞分化システムの確立

Research Project

Project/Area Number 16659260
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Hematology
Research InstitutionResearch Institute, International Medical Center of Japan

Principal Investigator

湯尾 明  国立国際医療センター(研究所), 血液疾患研究部, 部長 (90221663)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 佐伯 久美子  国立国際医療センター(研究所), 血液疾患研究部, 室長 (80322717)
Project Period (FY) 2004 – 2005
Project Status Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Fiscal Year 2004: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
KeywordsES細胞 / 血球 / フィーダー細胞 / 胚様体 / CD34 / 血液細胞 / 血管内皮細胞 / 無フィーダー培養
Research Abstract

ES細胞からの血球分化誘導においては、分化誘導効率の悪さ、2次造血の困難、骨髄系の分化の困難、等の諸問題が存在する。これらの諸問題は、従来頻繁に用いられていたフィーダー細胞であるOP9細胞の限界を示すものと考えられる。以上のような諸問題を克服するために、骨髄球系への分化誘導に優れていると報告されたフィーダー細胞10T1/2を用いて研究を行った。
まず、サイトカイン、増殖因子の存在下で、浮遊細胞を長期間培養し、球状の血球と思われる細胞の出現を観察し、少数のCD34陽性細胞が認められた。しかし、この方法では、その後、次第に死細胞が多くを占めるに至り、十分な分化細胞は得られなかった。
次に、10T 1/2細胞との共培養ではあるが、浮遊細胞ではなく接着細胞を継代して分化誘導を行ったところ、培養開始2週間目においてシート状コロニー(敷石状細胞からなる平たい円形のコロニー)が多数認められ、その中には球状細胞の集塊が載っている部分も多く認められた。この様な時期の細胞を回収して生細胞のCD34抗原発現量をFACSで定量したところ25%程度の陽性細胞が認められた。
さらに、胚様体を3日間形成させた後に10T 1/2細胞との共培養を行い、前期と同様に生細胞のFACS解析を行ったところ、30%とさらに高率のCD34陽性細胞が認められ、しかも、CD34発現の非常に高い分画が認められた。
無フィーダー分化培養の新しい試みとして、conditioned dishを作成して用いた。具体的には、胚様体を3日間形成後、C3H 10T 1/2細胞を培養したdishをグルタールアルデヒドで固定して、そこでES細胞の分化誘導を行った。この方法においても、敷石状の細胞が観察され、CD34陽性細胞が出現した。

Report

(2 results)
  • 2005 Annual Research Report
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (12 results)

All 2005 2004

All Journal Article (10 results) Book (2 results)

  • [Journal Article] Synergistic effects of dehydroepiandrosterone and retinoic acid on granulocytic differentiation of human promyelocytic NB4 cells.2005

    • Author(s)
      Nakatsu M, Doshi M, Saeki K, Yuo A
    • Journal Title

      Int J Hematol 81

      Pages: 32-38

    • NAID

      10014282556

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    • Author(s)
      Yano T, Itoh Y, Kubota T, Sendo T, Koyama T, Fujita T, Saeki K, Yuo A, Oishi R
    • Journal Title

      Am J Pathol 166

      Pages: 1333-1342

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    • Author(s)
      Saeki K, Yasugi E, Okuma E, Breit SN, Nakamura M, Toda T, Kaburagi Y, Yuo A
    • Journal Title

      Am J Physiol Endocrinol Metab 289

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    • Author(s)
      Horiuchi A, Yasugi E, Yuo A
    • Journal Title

      J Oleo Science 54

      Pages: 341-346

    • NAID

      130000055636

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    • Author(s)
      湯尾 明
    • Journal Title

      Medical Technology 33

      Pages: 127-128

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    • Author(s)
      Nakatsu M, Doshi M, Saeki K, Yuo A
    • Journal Title

      Int J Hematol 81

      Pages: 32-38

    • NAID

      10014282556

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      Pages: 1027-1031

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      湯尾 明
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      308
    • Publisher
      中外医学社
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Published: 2004-04-01   Modified: 2016-04-21  

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