| Project/Area Number |
16659355
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Digestive surgery
|
|---|
| Research Institution | Kyoto University |
|---|
Principal Investigator |
長谷川 傑 京都大学, 医学研究科, 助手 (10362500)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐藤 誠二 京都大学, 医学研究科, 講師 (00303834)
猪飼 伊和夫 京都大学, 医学研究科, 講師 (60263084)
蔦原 康行 京都大学, 医学研究科, 助教授 (30196498)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2004 – 2005
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2005)
|
| Budget Amount *help |
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
|
|---|
| Keywords | SIAH1 / β-catenin / Apoptosis / tumor suppressor gene / LOH / mutation / methylation / haplo-insufficiency |
|---|
| Research Abstract |
前年度の研究で肝細胞癌におけるSIAH1の発現低下の機序として肝細胞癌の臨床検体100例を用いたRT-PCRによるSIAH1の発現、LOH解析、メチレーション解析からhaploinnsufficiencyの可能性が示唆された。
次にin vitoroでのSIAH1の機能を解析した。hepatoma cell linesにおいてSIAH1の発現が低下しているHepG2,Huh7,SNU475を用いてCell viability assayを行うと、いずれもAd-SIAH1導入した細胞にviabilityの低下と細胞増殖抑制がおこった。次にflow cytometry、TUNEL assayを行うとAd-LacZと比べAd-SIAH1を導入したCell linesでsub-G1の増加、アポトーシス細胞の増加を認めた。次にSIAH1導入によるWntシグナル伝達系(Wnt系)に及ぼす影響を調べた。TCF4 assayではWnt系に異常の認めたHepG2とSNU475においてWnt系の亢進を認め、Ad-SIAH1を導入すると抑制された。β-カテニンのwestern blottingを行うとAd-SIAH1導入によりwild typeのβ-カテニンは分解されたがHepG2に認められるmutant typeのβ-カテニンは分解されなかった。そこで蛍光免疫染色でβ-カテニンの細胞内局在を検討したらHepG2で核に集積していたβ-カテニンがAd-SIAH1導入により核外に局在が変化した。よってHepatoma cell linesにおいてAd-SIAH1導入によるWnt系への影響はβ-カテニンの細胞内分解と局在変化によりWnt系を抑制している可能性がある。
今後SIAH1導入の効果をin vivoにおいても検討する予定である。
|
