| Project/Area Number |
16659439
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Urology
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
宮川 康 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (70362704)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
辻村 晃 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (40294053)
田中 宏光 大阪大学, 微生物研究所, 助手 (10263310)
奥山 明彦 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (20093388)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2004 – 2005
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2005)
|
| Budget Amount *help |
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2005: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2004: ¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
|
|---|
| Keywords | 精子 / 男性不妊症 / アクチン / アクチン結合蛋白 / 半数体 / キャッピング蛋白 |
|---|
| Research Abstract |
アクチンキャッピング蛋白(CP)はすべての哺乳類細胞に存在し、また進化上、最もよく保存されたアクチン調節蛋白である。CPはアルファ(CPα)とベータ(CPβ)の二つのsubunitからなるheterodimerを形成し、細胞内のアクチン骨格を調整する。申請者らは、マウス精巣subtracted libraryからCPαと相同性を示す半数体精子細胞特異的遺伝子CPα3の単離に成功した。さらに、ヒト精巣cDNA libraryからヒトオルソローグ遺伝子も単離した。ヒト精巣・精子では33kDaのCPα3蛋白が精子の主に中心体が存在する頚部及び鞭毛や頭部にも確認された。この局在はヒト精子におけるアクチンのそれと一致することが二重免疫染色にて明らかとなった。次にCPα3とheterodimerを形成する候補分子をコードするヒト新規遺伝子の単離に成功した(CPβ3)。この分子は牛の精子から単離されたCPβ3のヒトオルソローグ遺伝子であり、その発現はヒトでも精巣特異的であることが明らかとなった。さらにこの蛋白が、実際に蛋白レベルでCPα3と結合することが免疫沈降法によって確認された。さらにCPβ3特異的抗体の作成に成功し、免疫染色にて、この分子がやはりヒト精子の頚部や鞭毛を中心に存在することを明らかにした。またCPα3のノックアウトマウス作成のためのノックアウトベクターのクローニングに成功し、現在KOマウス(hetrozygote)の作成に成功しており、この維持解析を行っている。驚くことに、このマウスはすでに雄性不妊の表現形を示しており、ヒト不妊のモデルとなりうる可能性がある。
|
