| Project/Area Number |
16659568
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Orthodontic/Pediatric dentistry
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
白川 哲夫 北海道大学, 病院, 助教授 (00187527)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三留 雅人 北海道大学, 病院・講師 (50261318)
菊入 崇 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 助手 (10322819)
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| Project Period (FY) |
2004 – 2005
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2005)
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| Budget Amount *help |
¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000)
Fiscal Year 2005: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2004: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
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| Keywords | Msx1 / Pax9 / 内因性アンチセンスRNA / 歯胚発生 / in situ hybridization法 / 神経幹細胞 / GFP / 胎仔マウス |
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| Research Abstract |
内因性Msx1アンチセンスRNAとMsx1遺伝子の相互作用が先天性歯胚欠如に関与している可能性を検証するため、歯胚形成過程でのMsx1およびPax9の内因性アンチセンスRNAの発現と、各々のセンスRNAとアンチセンスRNAの相互作用を動物実験系を用いて検討した。
1)マウス胎仔歯胚発生領域でのMsx1およびPax9の内因性アンチセンスRNAの検出
麻酔下にて妊娠マウスから胎生9,12,15,18日目の胎仔を分離し、歯胚発生領域を含め、頭部よりtotal RNAを抽出した。得られたサンプルについて、RT-PCRによりMsx1およびPax9のセンスRNAおよびアンチセンスRNAの検出を試みた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNAについては胎生期のいずれのステージにおいてもPCR産物が検出された。一方、Pax9のセンスRNAおよびアンチセンスRNAの検出に関しては、センスRNAのPCR産物のみ検出が可能であった。このことから、Pax9のアンチセンスRNAについては、マウスの胎生期において発現していないかあるいは発現量がきわめて少ないものと考えられた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNAについてのin situ hybridization法による検出については、胎仔マウスの急速凍結切片を作製し、digoxigeninでラベルした非放射性プローブでのシグナル検出を試みたところ、センスRNAは胎生9日から、アンチセンスRNAでは胎生12日から上下顎骨領域に発現が認められた。Msx1のセンスRNAおよびアンチセンスRNA、ならびにPax9のセンスRNAが、歯胚形成期にどのような相互作用を発揮しているかについてはMSX1およびPAX9の定量を含め今後の検討が必要である。
2)神経幹細胞の胎仔顎骨部への移植と移植後の分化についての検討
胎生15日目のGFPトランスジェニックマウス胎仔の線条体より神経幹細胞を採取し、胎生18日目のマウスより分離した顎骨体部に移植し培養を行った。4%paraformaldehydeにて固定したのち、薄切切片を作製してレーザー共焦点顕微鏡による蛍光観察を行ったところ、グリア細胞様の形態を示す細胞への分化を確認した。歯胚組織へのGFP陽性細胞の侵入は認められなかった。
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