| Project/Area Number |
16700324
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Neurochemistry/Neuropharmacology
|
|---|
| Research Institution | Tottori University |
|---|
Principal Investigator |
柏木 明子 鳥取大学, 医学部, 教務員 (90335521)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2004 – 2005
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2005)
|
| Budget Amount *help |
¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2005: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2004: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
|
|---|
| Keywords | myelin protein / CNS specific / mass spectrometry / 2-DE / identification / localization |
|---|
| Research Abstract |
あるペプチドをウサギに免疫し、ポリクローナル抗体を作製した。この抗体を用いて、マウスの各組織について免疫組織化学染色を行った結果、脳の中枢神経系の有髄繊維にのみ陽性を呈する、中枢特異的ミエリンタンパク質様の免疫染色像を示した。さらにこの抗体を用いた免疫染色、ウエスタンブロットの結果、この抗体は偶然にも、中枢神経系特異的に局在し末梢神経系には局在しないような、分子量約70kDaのタンパク質(以下p70タンパク質と略す)を特異的に認識していることが確認された。
現在までに既にマウスにおいていくつかのミエリンタンパク質が同定されているが、分子量が異なることからこのp70タンパク質は既知のミエリンタンパク質とは別物の分子であることが分かる。以上の経緯から、この抗p70タンパク質抗体を用いて、中枢神経系特異的に局在を示す新規マウスミエリンタンパク質としてその抗原タンパク質の同定を試みた。
まず、この抗体をプローブとして、二次元電気泳動法によりマウス脳ライセートを展開し、ウエスタンブロットした。一般に、転写後もおよそ50%以上のタンパク質は転写されず、ゲル中に残存することが知られているため、同時に転写した後のゲルを銀染色した。ウエスタンブロットで得られた強いシグナルの場所に相当するスポットを、銀染色したゲルからパンチして精製し、飛行時間型質量分析装置にかけることによって同定するという実験系を現在進行している。
p70タンパク質の膜構造維持に果たす役割を検討するため、中枢神経系における電子顕微鏡レベルの免疫染色を用い、分布について調べた。p70抗体を用いた電顕免疫の結果、予想通りp70は中枢神経系の髄鞘特異的に分布する中枢神経系特異的ミエリンタンパク質であることが証明された。今後もp70の同定を急ぎ、また、発生段階を追ったp70の発現解析を進めたい。
|
