NK細胞活性化レセプターCD160の分子認識解明

• Project/Area Number: 16770078
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Structural biochemistry
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 前仲 勝実 九州大学, 生体防御医学研究所, 助教授 (10322752)
• Project Period (FY): 2004 – 2005
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2005)
• Budget Amount: ¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000); Fiscal Year 2005: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000); Fiscal Year 2004: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
• Keywords: MHC / CD160 / 相互作用解析 / NK細胞 / X線結晶構造解析 / NMR / がん細胞 / 巻き戻し

Research Abstract

CD160(BY55)レセプターは末梢血NK細胞(および細胞傷害性T細胞の一部)に発現し、NK細胞を活性化する。NK細胞活性化レセプター群の多くはそのリガンドが同定されていないが、最近CD160はホモ多量体を形成してMHCクラスI(MHCI)を認識することが細胞レベルで明らかにされた珍しいレセプターである。そこで、本研究ではCD160のMHCIに対する分子認識機構を機能(速度論及び熱力学)および立体構造解析(X線構造解析)の両面から分子レベルで明らかにすることにより、NK細胞の活性化機構を理解することを目的とする。
平成16年度に大腸菌の封入体からの巻き戻し系を用いて作製したCD160分子では、単量体しかえられないなど、生理的活性を有する状態にあるかどうか、不明な点が多くあった。また、このCD160多量体をゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィーによって単一な多量体分子を単離することは困難であり、大腸菌の分泌発現系を用いてもCD160分子を発現することができなかった。そこで、本年度は、CD160分子の単一な多量体の大量調製のために、本来CD160分子が発現しているヒト細胞である293細胞を用いた分泌発現系を構築した。シグナル配列を発現ペクター由来のものを用いて発現させたところ、3量体と2量体の混合物が得られ、シグナル配列のプロセッシングに問題があることが明らかとなった。そこで、天然のCD160由来のシグナル配列に戻したところ、単一の蛋白質としてCD160分子が得られた。

Research Products

• [Journal Article] Efficient leukocyte IG-like receptor signaling and crystal structure of disulfide-linked HLA-G dimer. (2006)
  • Author(s): 白石ら
  • Journal Title: J.Biol.Chem. (印刷中)
• [Journal Article] Entropically driven MHC class I recognition by human inhibitory receptor leukocyte ig-like receptor B1 (LILRB1/ILT2/CD85j). (2006)
  • Author(s): 白石ら
  • Journal Title: J.Mol.Biol. 355 Pages: 237-248
• [Journal Article] Preparation and crystallization of the disulfide-linked HLA-G dimer. (2006)
  • Author(s): 白石ら
  • Journal Title: Biochim Biophys Acta. (印刷中)
• [Journal Article] Extensive polymorphisms of LILRB1(ILT2,LIR1) and their association with HLA-DRB1 shared epitope negative rheumatoid arthritis. (2005)
  • Author(s): 黒木ら
  • Journal Title: Human Mol.Genetics. 14 Pages: 2469-2480
• [Journal Article] Expression, crystallization and preliminary diffraction studies of Pseudomonas putida cytochrome P-450cam operon repressor CamR. (2005)
  • Author(s): 前仲ら
  • Journal Title: Acta Crystallographica F. F61 Pages: 796-798
• [Journal Article] Crystallization and preliminary X-ray analysis of the mRNA binding domain of elongation factor SelB in complex with RNA. (2005)
  • Author(s): Rasubalaら
  • Journal Title: Acta Crystallographica F. F61 Pages: 296-298
• [Journal Article] Efficient large-scale protein production of larvae and pupae of silkworm by Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus bacmid system. (2005)
  • Author(s): 本橋ら
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun. 326 Pages: 564-569
• [Journal Article] VHL-box and SOCS-box domains determine binding specificity for Cul2-Rbx1 and Cul5-Rbx2 modules of ubiquitin ligases. (2005)
  • Author(s): 嘉村ら
  • Journal Title: Genes & Development 18 Pages: 3055-3065
• [Journal Article] Crystal structure of a biologically functional form of PriB from Escherichia coli reveals a potential single-stranded DNA-binding site. (2005)
  • Author(s): 塩井ら
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun. 326 Pages: 766-776
• [Journal Article] Structural basis for mRNA recognition by elongation factor SelB. (2005)
  • Author(s): 吉澤ら
  • Journal Title: Nature Structural & Molecular Biology 12 Pages: 198-203
• [Journal Article] Genetic Variability of the Major Histocompatibility Complex Class I Homologue Encoded by Human Cytomegalovirus Leads to Differential Binding to the Inhibitory Receptor ILT2. (2005)
  • Author(s): Vales-Gomezら
  • Journal Title: J.Viol. 79 Pages: 2251-2260