イネいもち病菌はいつどこで変異するのか

Research Project

Project/Area Number	16780029
Research Category	Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Plant pathology
Research Institution	Hokkaido University
Principal Investigator	曾根輝雄北海道大学, 大学院・農学研究科, 講師 (00333633)
Project Period (FY)	2004 – 2005
Project Status	Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help	¥3,700,000 (Direct Cost: ¥3,700,000) Fiscal Year 2005: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000) Fiscal Year 2004: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Keywords	いもち病 / 変異 / 組換え / RAD52 / イネ / 抵抗性 / 遺伝子破壊 / ベクター / 活性酸素
Research Abstract	1.新たな遺伝子のクローニング新たに非相同末端再結合に関わる遺伝子であるKu70,Ku80のいもち病菌ホモログ,Khm70,Khm80をPCRにより,日本産イネいもち病菌Ina168株より取得した.これらはこれまでにクローニングしていた遺伝子と同様,アカパンカビ(Neurospora crassa)のホモログと最も高い相同性を示した. 2.N.crassa変異株の相補による機能の確認これまでにクローニングしたRhm52,Rhm54,Mhm11,Khm70,Khm80をハイグロマイシン耐性プラスミドベクターpCSN43-DESTに連結し,それぞれN.crassaの変異株mus-11,mus-25,mus-23,mus-51,mus-52に導入し,変異の相補により遺伝子の機能を確認した.その結果,Rhm52,Rhm54,Khm80は相補が確認され,機能を持った遺伝子であることが示唆された.Mhm11,Rhm70は相補が見られなかったが,これらは複合体を形成し機能する遺伝子であり,その複合体の形成に問題があることが考えられた. 3.欠損変異株の作成昨年度開発したベクターをpDESTRと命名し,さらに同様の,ビアラフォス耐性遺伝子を選択マーカーとして持ったベクター,pBARSTを作成した.これらのベクターを使用し,Inverse PCR法によりRhm54,Rhm52,Khm70,Khm80破壊コンストラクトを作成した.10株の形質転換体から,欠損変異株を得ることができ,ベクターの有効性が証明された.