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微生物由来D-立体特異的ペプチダーゼと擬似基質を用いたペプチド合成に関する研究

Research Project

Project/Area Number 16780059
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Applied microbiology
Research InstitutionToyama Prefectural University

Principal Investigator

米田 英伸  富山県立大学, 工学部, 講師 (50285160)

Project Period (FY) 2004 – 2005
Project Status Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help
¥2,900,000 (Direct Cost: ¥2,900,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
KeywordsD-アミノ酸 / ペプチド合成 / ペプチダーゼ / Bacillus cereus
Research Abstract

Bacillus cereus DF4-B株由来のD-立体特異的ペプチダーゼ(アルカリD-ペプチダーゼ)はフェニルアラニンのオリゴペプチドをD-立体特異的に加水分解するエンドペプチダーゼであり、その一次構造は細菌由来のβ-ラクタマーゼやD-立体特異的アミノペプチダーゼと相同性を有するユニークな酵素である。本研究ではラセミ体アミノ酸アミドの光学分割やD-アミノ酸含有ペプチドの合成にしか利用されてこなかったD-立体特異的ペプチダーゼの新規利用法を開拓するため、Substrate mimeticsとよばれる擬似基質を用いたペプチド合成への本酵素の応用可能性を検討することを目的とした。前年度に引き続き、アルカリD-ペプチダーゼ及び、アルカリD-ペプチダーゼ相同タンパク質によるペプチド合成を検討した。ペプチド合成の収率や応用範囲に関してより優れた酵素を得るため、上記2種の酵素遺伝子にerror-prone PCR等の遺伝子操作によりランダム変異を導入し、ペプチド合成にかなう性質をもった変異酵素の取得を試みた。変異酵素を組換え大腸菌より精製し、酵素化学的な諸性質を明らかにして、野生型酵素と比較した。さらに、変異遺伝子の塩基配列を決定して、変異部位を同定し、その部位に対してその他のアミノ酸にランダムに変異を導入する、いわゆるサチュレーション変異を行い、酵素の性質がさらに向上した変異酵素の取得を試み、ペプチド合成への応用を検討した。

Report

(2 results)
  • 2005 Annual Research Report
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (8 results)

All 2006 2005 2004 Other

All Journal Article (8 results)

  • [Journal Article] L-Stereoselective amino-acid amidase with broad substrate specificity from Brevundimonas diminuta : characterization of a new member of the leucine aminopeptidase family2006

    • Author(s)
      Komeda, H., Hariyama, N., Asano Y.
    • Journal Title

      Appl.Microbiol.Biotechnol. 70

      Pages: 412-421

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] A DmpA-homologous protein from Pseudomonas sp. is a dipeptidase specific for β-alanyl dipeptides2005

    • Author(s)
      Komeda, H, Asano, Y.
    • Journal Title

      FEBS J. 272

      Pages: 3075-3084

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Asymmetric synthesis of L-α-methylcysteine with the amidase from Xanthobacter flavus NR3032005

    • Author(s)
      Inoue, A., Komeda, H, Asano, Y.
    • Journal Title

      Advanced Synthesis & Catalysis 347

      Pages: 1132-1138

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Purification, characterization, gene cloning and nucleotide sequencing of D-stereospecific amino acid amidase from soil bacterium : Delftia acidovorans2005

    • Author(s)
      Hongpattarakere, T., Komeda, H., Asano, Y
    • Journal Title

      J.Ind.Microbiol.Biotechnol. 32

      Pages: 567-576

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] S-Stereoselective piperazine-2-tert-butylcarboxamide hydrolase from Pseudomonas azotoformans IAM 1603 is a novel L-amino-acid amidase.2004

    • Author(s)
      Komeda, H., Harada, H., Washika, S., Sakamoto, T., Ueda, M., Asano, Y.
    • Journal Title

      Eur.J.Biochem. 271

      Pages: 1465-1475

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] A novel R-stereoselective amidase from Pseudomonas sp. MCI3434 acting on piperazine-2-tert-butylcarboxamide.2004

    • Author(s)
      Komeda, H., Harada, H., Washika, S., Sakamoto, T., Ueda, M., Asano, Y.
    • Journal Title

      Eur.J.Biochem. 271

      Pages: 1580-1590

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Purification, characterization, gene cloning and nucleotide sequencing of D-stereospecific amino acid amidase from soil bacterium Delftia acidovorans

    • Author(s)
      Hongpattarakere, T., Komeda, H., Asano, Y.
    • Journal Title

      J.Indust.Microbiol.Biotechnol. (in press)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Asymmetric synthesis of L-α-methylcysteine with the amidase from Xanthobacter flavus NR303

    • Author(s)
      Inone, A., Komeda, H., Asano, Y.
    • Journal Title

      Advanced Synthesis & Catalysis (in press)

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      2004 Annual Research Report

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Published: 2004-04-01   Modified: 2016-04-21  

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