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動物細胞のDNA鎖切断修復と非相同組換えに関する逆遺伝学的解析

Research Project

Project/Area Number 16790058
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Biological pharmacy
Research InstitutionYokohama City University

Principal Investigator

足立 典隆  横浜市立大学, 木原生物学研究所, 助手 (30264675)

Project Period (FY) 2004 – 2005
Project Status Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help
¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 2004: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
KeywordsDNA鎖切断 / DNA修復 / エンドジョイニング / ランダムインテグレーション / ジーンターゲティング / 非相同組換え
Research Abstract

ヒトNalm-6細胞およびニワトリDT40細胞を用いて,一本鎖DNA切断修復/塩基除去修復機構の解析を行った。具体的には,DT40細胞のFEN1変異株,DNAポリメラーゼβ変異株,FEN1/DNAポリメラーゼβ二重変異株の表現型解析と,Nalm-6細胞のDNAポリメラーゼβ変異株の作製と表現型解析を行った。その結果,アルキル化剤によるDNA損傷の修復においてショートパッチ経路,ロングパッチ経路がともに重要であるのに対し,酸化的損傷に対してはロングパッチ経路のみが重要であることを明らかにした。この結果は生化学的手法によっても確認できた。また,二本鎖DNA切断修復についても詳細な解析を行った。エンドジョイニング変異株の解析から,エンドジョイニング阻害によりランダムインテグレーションを抑制できることを明らかにした。さらに,本研究では,Nalm-6細胞を用いて,Rad54や,Xrcc3,Ku70,Ku80,DNA ligase III, DNA ligase IなどDNA一本鎖/二本鎖切断修復への関与が示唆される遺伝子およびp53遺伝子について,順次ジーンターゲティングを行った。また,これら遺伝子の二重変異株の作製を進めた。これら一連の変異株を利用して,トポイソメラーゼ阻害剤などの抗がん剤の細胞傷害作用を増強させる方策を考察した。また,DNAligase IV破壊株を詳しく解析した結果,ヒトとニワトリとで表現型が異なることを明らかにした。

Report

(2 results)
  • 2005 Annual Research Report
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (9 results)

All 2006 2005 2004

All Journal Article (9 results)

  • [Journal Article] Enhanced gene targeting efficiency by siRNA that silences the expression of the Bloom syndrome gene in human cells.2006

    • Author(s)
      So, S.et al.
    • Journal Title

      Genes Cells 11(4)

      Pages: 363-371

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Parp-1 protects homologous recombination from interference by Ku and Ligase IV in vertebrate cells.2006

    • Author(s)
      Hochegger, H. et al.
    • Journal Title

      EMBO J. 25(6)

      Pages: 1305-1314

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] The human pre-B cell line Nalm-6 is highly proficient in gene targeting by homologous recombination.2006

    • Author(s)
      Adachi, N. et al.
    • Journal Title

      DNA Cell Biol. 25(1)

      Pages: 19-24

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Heterozygous inactivation of human Ku70/Ku86 heterodimer does not affect cell growth, double-strand break repair, or genome integrity.2006

    • Author(s)
      Uegaki, K. et al.
    • Journal Title

      DNA Repair 5(3)

      Pages: 303-311

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Evidence for a role of vertebrate Rad52 in the repair of topoisomerase II-mediated DNA damage.2005

    • Author(s)
      Adachi, N. et al.
    • Journal Title

      DNA Cell Biol. (In press)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Generation and characterization of endonuclease G null mice.2005

    • Author(s)
      Irvine, R.A. et al.
    • Journal Title

      Mol.Cell.Biol. 25

      Pages: 294-302

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Genetic interactions between BLM and DNA ligase IV in human cells.2004

    • Author(s)
      So, S.et al.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. 279

      Pages: 55433-55442

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Loss of nonhomologous end-joining confers camptothecin resistance in DT40 cells--Implications for the repair of topoisomerase I-mediated DNA damage.2004

    • Author(s)
      Adachi, N. et al.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. 279

      Pages: 37343-37348

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Genetic evidence for involvement of two distinct nonhomologous end-joining pathways in repair of topoisomerase II-mediated DNA damage.2004

    • Author(s)
      Adachi, N. et al.
    • Journal Title

      Biochem.Biophys.Res.Commun. 318

      Pages: 856-861

    • Related Report
      2004 Annual Research Report

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Published: 2004-04-01   Modified: 2016-04-21  

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