プロテオミクス手法を用いたS100A12蛋白質の発現および作用機構の解明

• Project/Area Number: 16790516
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Metabolomics
• Research Institution: Kansai Medical University
• Principal Investigator: 長谷川 隆正 関西医科大学, 医学部, 助手 (90351535)
• Project Period (FY): 2004 – 2005
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2005)
• Budget Amount: ¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000); Fiscal Year 2005: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000); Fiscal Year 2004: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
• Keywords: S100A12 / 転写因子 / プロテオミクス / THP-1細胞 / チアゾリジン誘導体 / プロテオミクス解析

Research Abstract

これまでにヒト由来マクロファージ細胞株(THP-1細胞)を用いS100A12 mRNAの発現を定量しIL-6で有意な増加を、一方、PPARγのリガンドであるピオグリタゾン添加で有意な減少を報告した(Atherosclerosis 171:211-218,2003)。S100A12タンパク質の発現調節機構に関わる転写因子を明らかにするためにプロテオミクス手法を用いて検討を試みた。まず二次元電気泳動におけるタンパク質スポットの再現性・定量性を一般法とEttan DIGE法にて比較検討し、同一検体における再現性試験を行い確認した。
次にピオグリタゾンによって調節されるタンパク質を明らかにするためにTHP-1細胞にピオグリタゾンを添加した後に細胞よりタンパク質を抽出し二次元電気泳動を行った。これにより明らかとなる発現量の増加または減少したタンパク質を網羅的に解析するために、まず二次元電気泳動におけるタンパク質スポットの再現性・定量性を検討した。THP-1細胞においてピオグリタゾン添加により増加または減少したタンパク質スポットを複数認めた。しかし、その再現性・定量性は不安定であった。原因としてサンプル間の細胞可溶化効率のバラツキ、二次元電気泳動の不安定さが認められた。しかしゲルを複数使用した一般法よりEttan DIGE法の方が定量性・再現性に優れていた。しかし今回の目的であるPPARγのリガンドであるピオグリタゾン添加によるS100A12タンパク質の減少はプロテオミクス手法では再現性もって確認はできなかった。
したがって、プロテオミクス手法を用いたタンパク質の定量比較は差異の大きな物に限られると考えられた。